聚馬來酸烷基酯-側鏈烷基氨陽離子聚合物載體庫的平行合成及在腫瘤基因治療中的應用.pdf

1、基因治療是指將外源治療基因輸送到靶細胞、以糾正或補償基因缺陷的一種遺傳水平上的治療方法。在過去的幾十年中，基因治療已被證實是一種有效的具有低副作用的癌癥治療新手段。非病毒基因輸送載體包括陽離子聚合物、月旨質體、樹枝狀大分子和多肽等，因其具有生物相容性良好、免疫原性低、易于化學修飾和制備方便等特點而成為各大科研機構的研究熱點。然而與病毒載體相比，其臨床應用受限于低效的基因轉染效率。陽離子聚合物通過靜電相互作用中和負電性的DNA將其壓縮成納

2、米顆粒，保護DNA免受降解，同時促進細胞攝取，將DNA輸送到靶細胞中進行轉染。
　　迄今為止，已有大量的工作致力于通過平行合成的方式篩選出具有高轉染效率的陽離子聚合物。平行合成作為一種能夠通過調整單體結構快速合成大量具有功能多樣性聚合物的手段已經(jīng)引起越來越多的關注。在高通量篩選后，可挑選出具有高轉染效率的聚合物，并且可以清晰地闡明聚合物結構和轉染效率之間的關系，這對于今后設計高效轉染效率的非病毒基因輸送載體具有重要意義。目前用于平

3、行合成的方法往往局限于胺與丙烯酸酯或環(huán)氧反應，氨基硫醇與吖內酯加成后的開環(huán)聚合反應或passerini反應。因此我們迫切需要設計新型的載體合成路線來制備用于基因輸送的一系列高轉染效率的陽離子聚合物。
　　在此，本論文報道一種后修飾的方法來簡易合成一系列酯酶響應性的陽離子聚合物基因輸送載體。我們通過巰烯點擊反應將18種巰基胺側鏈單體鍵合于7種聚馬來酸烷基酯主鏈上，構建出一個包含126種可降解陽離子聚合物的基因輸送載體庫，從而克服現(xiàn)存

4、載體庫在功能和可擴展性方面的限制，并證明不同結構特征對基因輸送的影響。首先，使用熒光素酶編碼質粒作為報告基因，借助半高通量篩選的方法，評價陽離子聚合物的基因表達水平。在126種載體中，共有7種表現(xiàn)出高效的轉染效率，同時具有良好的抗血清能力。其次，使用增強的綠色熒光蛋白編碼質粒作為報告基因檢測表達細胞的百分比來評估7種聚合物的轉染效率。我們總結出聚合物結構對DNA包裹能力，轉染效率，polyplex大小的影響。再次，構建HeLa腹腔瘤模型