HGF-c-MET信號通路在克唑替尼抑制c-MET基因擴增的人肺腺癌細胞裸鼠移植瘤模型的作用機制研究.pdf

1、目的:建立人肺腺癌細胞動物移植瘤模型，研究克唑替尼對c-MET基因擴增非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的抑制作用及其機制，為克唑替尼在臨床治療原發(fā)或繼發(fā)c-MET基因擴增NSCLC的安全性及療效提供實驗資料和科學依據(jù)。
　　方法:將裸鼠隨機分為A組即H1993細胞模型組、B組即H1993細胞克唑替尼組、C組即A549細胞模型組、D組即A549細胞克唑替尼組、E組即空白對照組。細胞懸液

2、皮下注射法建立H1993細胞及A549細胞裸鼠移植瘤模型，實驗組裸鼠每天灌胃給予克唑替尼50 mg/kg，共14天，觀察克唑替尼對裸鼠體征變化的影響。采用免疫組織化學染色法（Immunohistochemistry，IHC）觀察裸鼠移植瘤組織中肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、c-MET及磷酸化c-MET（phosphorylated-MET，p-MET）蛋白的表達情況及克唑替尼對其表達的影響。

3、采用實時熒光定量多聚核苷酸鏈式反應(Real-time Quantitativepolymerase chain reaction，qPCR)研究克唑替尼對裸鼠移植瘤組織中c-MET、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（serine/threonine protein kinase，AKT）的mRNA表達量的影響。采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)研究克唑替尼對裸鼠移植瘤組織HGF/c-MET及其下游信號通路磷酸化水平的影響。

4、r>　　結果:
　　1、裸鼠進食量上，與E組相比，其余各組均有不同程度減少，其中A組最為顯著，除C組與D組外組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。裸鼠體重方面，B組與A組、C組及D組比較均有不同程度的增加(P＜0.001)，然與E組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);A組、C組及D組與E組相比，體重增長緩慢均有統(tǒng)計學意義(P＜0.001)，其中A組最為顯著;C組與D組比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2、克唑替尼對H19

5、93細胞移植瘤抑制率為72.3％，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);對A549細胞移植瘤抑制率為1.3％，抑制作用不明顯(P＞0.05)。
　　3、IHC檢測結果可知，HGF蛋白在A組及B組的陽性表達率和平均染色強度均高于C組及D組，然差別無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。c-MET蛋白在A組及B組的表達亦均高于C組及D組，組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.0001），但組內(nèi)無顯著性差異(P＞0.05)。p-MET蛋白在A組的表達顯著高于其

6、余各組(P＜0.0001)，而在B組的表達有低于其余各組的趨勢(P＞0.05)，C組、D組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4、B組c-MET、AKT的mRNA表達與A組差異不明顯(P＞0.05);類似地，D組與C組相比亦無明顯變化（P＞0.05）。而A組及B組的表達亦均高于C組及D組，組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001; P＜0.001;P＜0.05; P＜0.001)。
　　5、蛋白質(zhì)印跡法結果可知，c-MET、A

7、KT、胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)蛋白于A組及B組的表達量均顯著高于C組及D組（P＜0.001; P＜0.05; P＜0.01），而組內(nèi)表達無差異(P＞0.05);p-MET蛋白則A組表達量高于其余各組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);p-AKT蛋白于A組的表達量均高于其余各組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001; P＜0.05; P＜0.05);p-ERK蛋白于