BCG誘導形成的NETs在膀胱癌治療中作用機制的相關研究.pdf

1、目的：
　　探討中性粒細胞胞外捕獲網（neutrophil extracelluar traps, NETs）對膀胱癌T24細胞遷移、侵襲的影響及NETs對外周血單個核細胞（PBMCs）增殖、細胞因子表達的影響；探討NETs對小鼠膀胱腫瘤生長及膀胱腫瘤中CD3表達的影響。
　　方法：
　　將卡介苗（BCG）與中性粒細胞共同培養(yǎng)4小時誘導NETs形成，制備NETs懸液；取不同濃度NETs與膀胱癌T24細胞共同培養(yǎng)，通過劃

2、痕實驗、Transwell實驗方法，分析NETs對膀胱癌T24細胞遷移、侵襲的影響；取不同濃度NETs與PBMCs共同培養(yǎng)，通過CCK-8、流式細胞術及ELISA法，分析NETs對PBMCs增殖、PBMCs細胞表面CD4、CD8的表達和PBMCs分泌Th1型細胞因子TNF-α及IFN-γ的水平。建立Balb/c小鼠皮下膀胱腫瘤模型，將BCG誘導形成的NETs懸液皮下注射，同時設立陰性對照組，觀察小鼠的一般狀況和腫瘤生長情況；摘取腫瘤，對

3、腫瘤組織標本行HE染色，觀察腫瘤病理情況；進行CD3免疫組織化學染色，檢測膀胱腫瘤中免疫細胞的分布情況。
　　結果：
　　1.劃痕實驗和Transwell遷移實驗結果顯示：不同濃度NETs與膀胱癌T24細胞共同培養(yǎng)后，實驗組（1×NETs組和2×NETs組）與對照組相比，膀胱癌T24細胞遷移能力明顯減弱,差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2. Transwell侵襲實驗結果顯示：不同濃度NETs與膀胱癌T24細胞

4、共同培養(yǎng)后，實驗組（1×NETs組和2×NETs組）與對照組相比，膀胱癌T24細胞侵襲穿過小室的細胞數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　3.不同濃度的NETs作用于PBMCs細胞后，NETs能夠明顯促進PBMCs細胞增殖，隨著NETs濃度增加，PBMCs細胞增殖作用逐漸減弱。
　　4.流式細胞術結果顯示：實驗組（0.5×NETs組及2×NETs組）PBMCs細胞CD4表達量與對照組相比明顯增加，差異有統(tǒng)計學

5、意義（P＜0.05），0.5×NETs組與2×NETs組相比無明顯差異；PBMCs細胞CD8表達量各組之間均無明顯差異。
　　5.不同濃度NETs與PBMCs共同培養(yǎng)后，PBMCs細胞在不同時間點(24h、48h、72h)分泌TNF-α及IFN-γ的水平與對照組相比明顯增加，隨著NETs濃度增加，PBMCs細胞分泌TNF-α及IFN-γ的水平逐漸降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　6.在小鼠皮下注射NETs懸液14

6、天后，摘除腫瘤，NETs組小鼠皮下腫瘤體積和腫瘤重量均明顯小于陰性對照組；另外，HE染色病理結果顯示均為惡性腫瘤細胞；
　　7.免疫組化檢測結果顯示：NETs組腫瘤組織中CD3細胞陽性數(shù)較陰性對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。
　　結論：
　　1. BCG誘導形成的NETs在體外能夠抑制膀胱癌細胞遷移和侵襲作用。
　　2. NETs可以促進PBMCs細胞的增殖作用，并能促進PBMCs細胞表面CD