IL-22對(duì)HUVECs細(xì)胞因子表達(dá)、增殖功能及屏障功能的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)檢測(cè)IL-22（白細(xì)胞介素22）在細(xì)胞因子表達(dá)、細(xì)胞增殖功能以及屏障功能方面對(duì)HUVECs（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）的影響，來(lái)探討IL-22對(duì)血管炎發(fā)生發(fā)展的影響。
　　方法：
　　1.用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)IL-22R1在HUVECs中的表達(dá)情況。
　　2.實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)以及Western blot技術(shù)分別用于檢測(cè)IL-22作用前后IL-6, IL-8, CCL2, ICAM1, VCAM1

2、, CXCR4及 CCL20等細(xì)胞因子在HUVECs中mRNA水平以及蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化情況。
　　3.通過(guò)CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的IL-22作用前后HUVECs的增殖能力變化情況與不同濃度的LPS對(duì)HUVECs的增殖抑制情況。另外將不同濃度的IL-22作用于HUVECs預(yù)處理24h后，再將等濃度的LPS作用于細(xì)胞24h，最后用CCK8實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)IL-22對(duì)LPS的增殖抑制是否有對(duì)抗作用。
　　4.用FITC標(biāo)記的右旋糖

3、酐通過(guò)HUVE單層細(xì)胞的滲透率來(lái)檢測(cè)不同濃度的IL-22作用前后HUVECs的屏障功能變化情況以及不同濃度的LPS對(duì)HUVECs屏障功能的影響。另外將不同濃度的IL-22作用于HUVECs預(yù)處理24h后，再將等濃度的LPS作用于細(xì)胞24h，最后用FITC標(biāo)記的右旋糖酐通過(guò)HUVE單層細(xì)胞的滲透率來(lái)檢測(cè)IL-22對(duì)LPS的屏障破壞是否有對(duì)抗作用。
　　結(jié)果:
　　1.IL-22R1 mRNA在HUVECs中持續(xù)表達(dá)。
　

4、　2.IL-22作用于HUVECs后，趨化因子CCL2和 CCL20的表達(dá)在mRNA水平及蛋白質(zhì)水平均可見明顯增加，而炎癥因子IL-6及IL-8的表達(dá)則未見明顯變化。
　　3.IL-22作用于HUVECs后，HUVECs的增殖率得到顯著提高。LPS可以顯著抑制HUVECs的增殖率。被IL-22預(yù)處理過(guò)的HUVECs其增殖率不受LPS的抑制。
　　4.IL-22作用于HUVECs后，HUVECs的滲透率下降，occludin的

5、表達(dá)增強(qiáng)。LPS可以提高HUVECs的滲透率并降低occludin的表達(dá)。被IL-22預(yù)處理過(guò)的HUVECs其滲透率受LPS的影響減少，occludin的表達(dá)情況同單獨(dú)用IL-22作用后相似。
　　結(jié)論:
　　1.IL-22的受體IL-22R1在HUVECS中廣泛表達(dá)，表明HUVECs是IL-22作用的靶細(xì)胞之一。
　　2.IL-22還可以提高趨化因子CCL2與CCL20的表達(dá)，卻對(duì)炎癥因子IL-6及IL-8的表達(dá)無(wú)明