脂肪干細胞聯(lián)合血管內皮細胞修復兔尿道缺損的實驗研究.pdf

1、背景：先天性尿道下裂、尿道損傷、尿道狹窄等是泌尿外科常見疾病，其有效解決辦法仍然依賴于外科手術治療，而尿道成形及重建術是主要的治療方式。尿道成形術及重建術種類較多，目前將近有300余種，并且眾多學者和醫(yī)學工作者還一直在對其進行改良和創(chuàng)新。然而，對于長段尿道缺損、尿道狹窄及復雜型尿道損傷的患者而言，術后出現(xiàn)尿瘺、尿道狹窄等并發(fā)癥的情況還仍然較高，成為令泌尿外科醫(yī)師頗為頭疼的問題。相關研究表明，術后尿道的血液供應情況與上述并發(fā)癥的發(fā)生也存在

2、的一定的聯(lián)系。隨著組織工程技術和干細胞技術的發(fā)展，理想的尿道修復支架材料和良好的種子細胞在基礎研究及臨床上取得了令人滿意的成果。脂肪干細胞（Adipose derived stem cell，ADSCs）來源較廣泛、取材方便、再生能力較強且具有向骨組織、軟骨組織、心肌組織及上皮組織分化的潛能等優(yōu)點，使其在組織工程領域種子細胞的研究中逐漸成為眾多研究者研究的熱點。同時，血管內皮細胞（Vascular endothelial cell，VE

3、C）是一種多功能的細胞，位于血管內壁，許多機體的發(fā)病過程均有其參與。大量動物實驗及臨床資料表明，VEC在改善機體缺血部位和損傷部位的血供方面有著得天獨厚的優(yōu)勢。近年來，ADSCs和VEC分別單獨聯(lián)合支架材料用來修復尿道的研究報道逐漸增多，且取得了一定的成果。然而“脂肪干細胞聯(lián)合血管內皮細胞修復兔尿道缺損”的文獻尚未見報道。
　　目的：探討應用“脂肪干細胞(ADSCs)和血管內皮細胞(VEC)體外共培養(yǎng)，聯(lián)合脫細胞基質材料構建人工尿

4、道”修復兔尿道缺損的效果。
　　方法：⑴體外分離、培養(yǎng)、擴增兔脂肪干細胞，并利用流式細胞儀進行鑒定；⑵血管內皮細胞的提取、培養(yǎng)及鑒定；⑶ADSCs與VEC進行共培養(yǎng)；⑷分別將ADSCs、VEC以及二者共培養(yǎng)細胞分別與脫細胞基質結合，構建組織工程化尿道；⑸將60只雄性成年新西蘭兔隨機數(shù)字法分為5組，分別將其陰莖腹側尿道制作成缺損長度為2.0cm的動物模型。A組(無細胞對照組)即：單純應用異種脫細胞基質修復組。B組（假手術組）即：尿道

5、缺損模型制作成功后，將尿道缺損后的兩個尿道斷端直接行端端吻合；C組（ADSCs組）即：脂肪干細胞復合異種脫細胞基質手術修復組；D組（VEC組）即：血管內皮細胞復合脫細胞基質手術修復組；E組（ADSCs與VEC共培養(yǎng)組）即：ADSCs與VEC共培養(yǎng)后復合異種脫細胞基質手術修復組；⑹術后于第1W、2W、4W、12W分別取A、B、C、D、E組實驗動物的重建尿道組織，行組織學及免疫組化觀察分析；⑺術后12W時分別對各組實驗動物行逆行尿道造影及尿

6、動力學檢查。
　　結果：①體外培養(yǎng)、擴增的ADSCs為梭形。應用流式細胞儀檢測表型CD44、CD105陽性，而 CD34陰性，符合間充質干細胞特征；VEC原代細胞呈貼壁生長，細胞形態(tài)多樣，圓形、橢圓形、長梭形或多角形，傳代內皮呈鋪路石樣；共培養(yǎng)細胞7天時部分細胞仍保留原有的梭形，另外一部分細胞形態(tài)不同于前者，可呈多角形，巢樣分布，14天時觀察可見細胞間存在許多相互連接的突觸，并且部分細胞可融合成團塊狀；②E組檢測尿路上皮血管內皮細

7、胞因子（FⅧ）、平滑肌肌動蛋白（a-SMA）均為陽性，與脫細胞基質復合均生長良好；③術后1W、2W、4W、12W時分別對各組兔子尿道行組織學觀察，可見E組毛細血管數(shù)目及平滑肌明顯多于C、D組；④統(tǒng)計學結果顯示C、D、E三組和A組相比術后出現(xiàn)并發(fā)癥的幾率低；而C、D、E三組之間相比術后并發(fā)癥發(fā)生率則無明顯差異。
　　結論：⑴ADSCs和VEC經體外共培養(yǎng)后可作為種子細胞應用于組織工程化尿道的構建和長段尿道缺損的修復。⑵VEC可支持A