重組溶瘤腺病毒對(duì)人腫瘤細(xì)胞的體內(nèi)、外抑制作用研究.pdf

1、近年來(lái)我國(guó)癌癥的發(fā)病率和死亡率逐年攀升，嚴(yán)重威脅著人類健康及生命。據(jù)統(tǒng)計(jì)僅2015年中國(guó)新增癌癥患者人數(shù)約為429.2萬(wàn)，死亡人數(shù)約為281.4萬(wàn)。目前臨床上多采用手術(shù)和放化療法治療癌癥，但因上述療法缺乏對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性，導(dǎo)致治療過程中正常細(xì)胞也嚴(yán)重受損，因此急需探索腫瘤治療的新方法?；蛑委熓且环N惡性腫瘤的生物療法，但關(guān)鍵問題是如何安全高效地將治療基因遞送至人體內(nèi)。目前腫瘤基因治療中腺病毒載體應(yīng)用最廣泛，溶瘤腺病毒的優(yōu)勢(shì)是僅殺傷腫瘤

2、細(xì)胞但不傷害正常細(xì)胞，因此可作為一種抗腫瘤基因藥物加以應(yīng)用。凋亡素（Apoptin）是雞貧血病毒VP3基因編碼的一種功能蛋白，僅在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制；血凝素-神經(jīng)氨酸酶（HN）是新城疫病毒的一種表面蛋白，能激活細(xì)胞凋亡途徑。因此本研究構(gòu)建表達(dá)Apoptin和HN的重組腺病毒Ad-VT（Ad-Apoptin-hTERTp-E1a）和Ad-HP（Ad-HN-PEG3p-E1a），研究其是否能成為有效的抗腫瘤基因藥物。
　　本研究分別用Ad

3、-VT感染人骨肉瘤和正常細(xì)胞，以及用Ad-HN-PEG3p-E1a感染人胃癌細(xì)胞。通過MTT法檢測(cè)重組腺病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的增殖抑制率。體外實(shí)驗(yàn)中，在熒光顯微鏡下觀察腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞經(jīng)AO/EB染色、DAPI染色后的形態(tài)學(xué)變化；再利用Annexin V/PI方法通過流式細(xì)胞術(shù)和染色分析重組腺病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用方式，并通過Caspase酶活性檢測(cè)以上重組腺病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用途徑。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，采取構(gòu)建動(dòng)物模型并考察腫瘤生

4、長(zhǎng)趨勢(shì)和平均生存期。
　　Ad-VT和Ad-HN-PEG3p-E1a能抑制兩種腫瘤細(xì)胞增殖，并伴隨一定的時(shí)間效應(yīng)和劑量效應(yīng)關(guān)系，但對(duì)正常細(xì)胞無(wú)影響。體外實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證了以上兩種重組腺病毒能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，且是通過激活Caspase相關(guān)酶方式實(shí)現(xiàn)的。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，Ad-VT和Ad-HN-PEG3p-E1a能有效減緩瘤體生長(zhǎng)并能延長(zhǎng)平均生存期。
　　結(jié)果表明，Ad-VT（Ad-Apoptin-hTERTp-E1a）和Ad-HP（Ad