豬MEF2A基因的克隆及表達規(guī)律的研究.pdf

1、MEF2家族屬于MADS超家族，廣泛的存在于骨骼肌與心肌細胞中，是最早發(fā)現(xiàn)具有肌肉調(diào)控特性的DNA結合活性因子。MEF2是肌肉組織發(fā)生和發(fā)育過程中的重要調(diào)控因子，控制脊椎動物肌肉特異基因表達，在肌纖維發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中都起重要調(diào)節(jié)作用。基于肌細胞增強子在調(diào)控細胞增殖和肌肉分化中的重要作用，進一步揭示其功能和作用機理，有助于更好的理解肌肉組織的發(fā)生與發(fā)育模式。本研究采用比較基因組學和生物信息學等方法，克隆MEF2A基因并對其結構進行分析

2、；通過構建分子進化樹來研究MEF2A基因的系統(tǒng)發(fā)育：采用RealtimePCR方法，研究了純種大白豬MEF2A基因不同組織不同發(fā)育階段的表達規(guī)律和MEF2家族4個基因的組織表達規(guī)律。主要研究結果如下： 1.克隆了豬MEF2A基因cDNA序列(GenbankAccessionNumber:EF576923)，基因編碼區(qū)全長1524bp，編碼508個氨基酸，分子量為50844.98Da，其結構上存在一個MADS-box的結構域、位

3、于10-243附近。 2.對豬MEF2家族基因的4個基因進行多重序列比對，發(fā)現(xiàn)一個極高的同源性區(qū)域，此處主要為MADS-box區(qū)。4個基因的MADS保守結構域同源比對分析，表明MEF2B與MEF2D的MADS-box結構域的同源性最高為100％，MEF2A與MEF2B和MEF2D的MADS-box結構域分化程度最大，同源性為89％。 3.基于豬MEF2A基因的cDNA序列，依據(jù)Neighbor-Joining算法，構

4、建了9個物種分子進化關系樹。 4.采用RealtimePCR的方法對90、180、270日齡純種大白豬的MEF2A基因心、肝、胃、脾、腎、肺、大腸、小腸、背肌、腿肌10個組織表達量進行了檢測：表明MEF2A基因在肌肉組織中表達量較高且穩(wěn)定，在其他組織中表達量較低，肝中的表達量最低。 5.同樣方法對90日齡MEF2家族4個基因進行了10個組織的表達量檢測，4個基因組織表達上具有共同特征：肌肉組織(背肌、腿肌、心肌)表達