蠟樣芽孢桿菌M22超氧化物歧化酶（SOD）基因在畢赤酵母中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase;EC 1.15.1.1;SOD)是廣泛存在于生物體內的金屬酶,是機體內唯一以超氧陰離子自由基(Oˉ<,2>)為底物的酶,它能專一地催化Oˉ<,2>的歧化反應,生成過氧化氫和氧氣,能有效的抵御氧自由基和其他氧化物自由基對細胞質膜的毒性,對機體防御氧化損傷起著十分重要的作用.該研究成功構建了畢赤酵母(Pichiapastoris)胞內表達質粒pPICZA-sodM18,質粒線性化后通

2、過電激法導入畢赤酵母GS115,Zeocin抗性梯度篩選得到高拷貝重組菌株.PCR鑒定及Mut表型分析進一步說明,目標基因已經重組到宿主菌基因組染色體上;0.5﹪甲醇誘導表達后,SDS-PAGE結果顯示,表達的蛋白相對分子量約為23kD,活性電泳出現(xiàn)明顯活性條帶;酶活性測定顯示,重組菌株SOD活性比對照提高5倍左右;氯仿-乙醇(3:5/V:V)和KCN(5mmol/L)抑制反應進一步證明,所表達的SOD為錳超氧化物歧化酶.結果表明來源于

3、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)的Mn-sod2基因在畢赤酵母中得到正確表達.成功構建了畢赤酵母(Pichiapastoris)分泌表達質粒pPICZoA-sodM18、pPICZαA-sodC,質粒線性化后通過電激法導入畢赤酵母GS115,Zeocin抗性梯度篩選得到高拷貝重組菌株.PCR鑒定進一步說明,目標基因已經重組到宿主基因組染色體上;0.5﹪甲醇誘導表達后,活性電泳出現(xiàn)明顯活性條帶,重組酵母發(fā)酵液中Mn-SOD的

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