鉻和鎂聯合補充對糖耐量異?；颊哐h(huán)miRNA差異表達的研究.pdf

1、I分類號：R587密級：公開UDC：610610學校代碼：11065博士專業(yè)學位論文鉻和鎂聯合補充對糖耐量異?；颊哐h(huán)鉻和鎂聯合補充對糖耐量異常患者循環(huán)miRNAmiRNA差異表達的研究差異表達的研究張方華指導教師閻勝利教授學位類別博士學位專業(yè)領域內科學（內分泌與代謝）答辯日期2017年11月17日答辯委員會主席何蘭杰主任醫(yī)師III預組，60人），干預時間為3個月。2.實驗方法：鉻鎂干預組給予鉻（120μgd）鎂（200mgd）補充治療

2、。安慰劑對照組給予服用安慰劑。按照常規(guī)方法進行血壓、體重和身高的測量。測定血糖、糖化血紅蛋白、空腹胰島素及血脂。3.RNA提?。好拷M隨機抽取5例受檢者10ml外周靜脈血于美國BD公司的VacutainerSSTTM采血管中。采用美國Qiagen公司的miRNeasy血清血漿提取試劑盒提取循環(huán)miRNA。質控分析采用美國Agilent公司的生物分析儀2100系統(tǒng)進行，所用試劑盒為AgilentRNA6000Nano和小RNA試劑盒。4.微

3、小RNA測序：采用IlluminaHiseq2000系統(tǒng)進行miRNA的測序，文庫構建采用KAPARNAHyperPrepKits，按照使用說明書進行操作。5.熒光定量PCR（qPCR）：miRNA的qPCR引物購于廣州市銳博生物科技有限公司（ribobio）。采用SYBR法，Mastermix購于美國ThermoFisher公司。采用2ddCT法進行數據分析，內參基因為RNU6B、miR454、miR425。6.miR1825p和mi

4、R965p靶基因的預測分析：采用軟件TargetScan（v6.2）、Mira（20101101）和MicrocosmV5進行miR1825p和miR965p靶基因的預測，采用軟件Vennytool（v2.0.2）進行上述三個預測軟件共同靶基因的篩選。7.miR1825p和miR965p功能富集分析：上述預測出的共同靶基因進行geneontology（GO）與KyotoEncyclopediaofGenesGenomes（KEGG）信號

5、通路分析，采用的軟件為美國Arraystar公司的分析軟件。8.靶基因驗證：將miRNA的agomir或antagomir與帶有報告基因的載體共同導入HITT15胰島β細胞中，通過熒光強度值的變化來反應目的miRNA與預測靶基因的結合情況。9.統(tǒng)計學方法：采用GraphPad軟件，qPCR的結果以?xSEM表示。臨床數據采用均數標準差(?xSD)的形式表示。統(tǒng)計學分析采用軟件GraphPad自帶的數據分析功能進行操作。應用非配對t檢驗進