新型混合模式介質制備及牛初乳免疫球蛋白分離研究.pdf

1、混合模式層析是一種新型的生物分離方法，其功能配基兼具多種相互作用模式，吸附容量大，選擇性高，洗脫條件溫和。本文結合親硫層析和疏水性電荷誘導層析，篩選新型混合模式配基，制備新介質，并用于牛初乳免疫球蛋白的分離純化。親硫層析對免疫球蛋白的特異性吸附需借助高鹽濃度實現(xiàn)，而疏水性電荷誘導層析具有非鹽依賴的吸附特性，本文結合兩者優(yōu)點，新型配基兼具親硫作用、疏水作用和靜電作用，在高鹽和低鹽條件下都可以高效吸附免疫球蛋白，且吸附能力隨pH改變呈顯著變

2、化，可以實現(xiàn)高效洗脫。本文研究包括介質制備、吸附性能測定和牛初乳免疫球蛋白分離三部分。
　　以Bestarose4FF瓊脂糖凝膠微球為基質，經二乙烯基砜活化，偶聯(lián)4-巰基乙基吡啶、2-巰基咪唑、2-巰基-1-甲基咪唑和3-巰基-1，2，4-三氮唑等4種配基，制備了新型混合模式介質，分別命名為Bestarose-DVS-MEP、Bestarose-DVS-MI、Bestarose-DVS-MMI和Bestarose-DVS-MTI。

3、優(yōu)化了基質活化和配基偶聯(lián)的反應條件，配基密度約為60～70μmol/ml基質，偶聯(lián)效率約60％。
　　考察了新型混合模式介質對牛初乳免疫球蛋白的靜態(tài)吸附性能和吸附動力學。結果表明，4種新介質具有吸附容量大和非鹽依賴性吸附的特點，增加硫酸鹽濃度能加快吸附過程，且對吸附量影響較小。Bestarose-DVS-MEP、Bestarose-DVS-MI和Bestarose-DVS-MMI對pH敏感，pH7吸附容量高，pH4可實現(xiàn)牛初乳免疫

4、球蛋白的解吸。
　　新型混合模式層析從牛初乳蛋白粉溶液中分離免疫球蛋白。比較了不同介質的分離效果，發(fā)現(xiàn)Bestarose-DVS-MI是最合適的介質。進一步優(yōu)化了層析分離條件，選擇pH7進樣，pH4洗脫，進樣濃度25 mg/ml，進樣量1ml，牛初乳免疫球蛋白純度達95％，純化因子為6.2，收率約64.2％。
　　本文篩選出2-巰基咪唑作為混合模式新配基，制備了新型混合模式介質，用于分離牛初乳免疫球蛋白，取得了較好的結果，為