魚藤酮慢性帕金森病小鼠黑質區(qū)α-synuclein蛋白表達的研究.pdf

1、目的：⑴研究小鼠長期暴露于殺蟲劑魚藤酮后的行為學改變,及小鼠中腦黑質區(qū)多巴胺能神經元病理變化情況。⑵探討魚藤酮慢性PD小鼠模型腦黑質部α-syn蛋白表達改變,以及α-syn蛋白表達改變的時間規(guī)律。
　　 方法：①選取8周齡、健康、雄性C57BL,小鼠30只；共分五組,每組小鼠6只。分組給藥:第1組為對照組,每天給予背部皮下注射DMSO:生理鹽水為3.5L:1g的混合液,1ml/kg；第2組至第5組為實驗組,各組分別按照0.5mg

2、/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0 mg/kg的劑量,予背部皮下注射魚藤酮溶液；每日一次,連續(xù)注射40天。末次注射后3天,利用爬桿實驗、游泳實驗和自由活動實驗進行行為學檢測,觀察各組小鼠的活動能力的變化情況；采用HE染色法、尼氏染色和DAB免疫組織化學法,觀察黑質多巴胺細胞形態(tài)的改變、黑質酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)陽性多巴胺能神經元數量及α-syn表達量的改變。②通過以上實驗,篩選出適

3、合劑量的魚藤酮模型作為后續(xù)實驗模型組,并重新造模。在末次注射后3d.、30d、60d三個不同的時間點,利用爬桿實驗、游泳實驗和自由活動實驗觀察各組小鼠的行為學改變；采用HE染色法觀察黑質多巴胺細胞形態(tài)改變；采用DAB免疫組織化學法檢測黑質TH陽性的多巴胺能神經元數量的改變,同時用免疫組化法、RT-PCR技術檢測α-syn在黑質區(qū)多巴胺能神經元的表達情況。
　　 結果：⑴2.0mg/kg、1.5mg/kg注射組小鼠死亡率高,分別為

4、100％和50％,放棄繼續(xù)進行藥物注射；1.0mg/kg魚藤酮注射組小鼠有明顯豎毛、震顫、動作徐緩、逃避反應慢等帕金森病樣癥狀。爬桿實驗、游泳實驗和自由活動實驗檢測發(fā)現,實驗組小鼠較對照組小鼠的活動能力明顯減弱,并有顯著差異(p<0.05),而0.5mg/kg魚藤酮注射組和對照組沒有明顯差異。⑵形態(tài)學檢查結果:1.0mg/kg組小鼠HE染色發(fā)現魚藤酮組小鼠黑質區(qū)多巴胺能神經元形態(tài)不規(guī)則；多巴胺能神經元尼氏染色發(fā)現尼氏小體較對照組減少；實

5、驗組小鼠中腦黑質部TH免疫組織化學染色陽性細胞數減少(P〈0.05)。故選取1.0mg/kg魚藤酮注射組作為后續(xù)實驗動物模型。⑶在造模完成后動態(tài)觀察小鼠行為學發(fā)現,小鼠的行為學損害逐漸恢復；DAB免疫組織化學結果:①與對照組比較j3d實驗組小鼠中腦黑質部TH免疫組織化學染色陽性細胞數減少31‰39％(p<0.05)；在2個月的觀察中發(fā)現,TH陽性多巴胺能神經元有所恢復,但是仍然交對照組少。②魚藤酮實驗組與對照組比較,魚藤酮組小鼠中腦黑質

6、部0L.syn陽性染色增多,積分光密度值(IOD)增高,小鼠中腦黑質ot-syn表達較對照組增加約30％,差別有顯著性(p<0.05)；并有a-syn陽性聚集體的形成。③實驗組小鼠成模后2個月,其中腦黑質的僅.syn表達仍較對照組高。⑷RT-PCR結果顯示:魚藤酮實驗組小鼠成模后3d時僅.syn的mRNA明顯增高；1月后恢復正常。
　　 結論：①魚藤酮1.0mg/kg處理40d的小鼠能產生PD樣的臨床和病理改變,可作為研究PD的