定量跨胎盤RNA干擾技術在模型動物建立的應用.pdf

1、目的：
　　 應用跨胎盤RNA干擾技術抑制胚胎鼠BMP-4基因，為獲取基因下調小鼠探索經濟高效技術。2006年O'Shea發(fā)現(xiàn)在小鼠胚胎早期用含單基因質粒干擾可以跨過胎盤下調妊鼠靶基因引起子代鼠相關組織器官發(fā)育障礙，并產生畸形小鼠。本課題組在前期工作基礎條件下申請NSFC，歷時五年研究定量跨胎盤RNAi技術。其間，探索影響跨胎盤RNA干擾技術的條件并首次建立了相關技術平臺;應用該技術構建先天性疾病模型動物。
　　 方法：

2、
　　 構建發(fā)育相關基因BMP-4下調質粒。通過尾靜脈向孕鼠注射Ringer's液、pSES質粒、pSES-SiBMP-4質粒。部分孕鼠注射48小時后取出胚胎觀測胚胎發(fā)育變化，并應用RT-PCR及Western blotting檢測BMP-4基因mRNA和蛋白質;部分孕鼠自然分娩后研究子代鼠生長發(fā)育變化，并用恰當?shù)臋z查診斷。
　　 結果：
　　 pSES-SiBMP-4組胚胎BMP-4基因mRNA及蛋白表達較Ri

3、nger's組、pSES組下調(P＜0.05)。Ringer's組、pSES組胚胎鼠發(fā)育無明顯異常，pS ES-SiBMP-4組胚胎鼠頭部、胃腸道及脊柱發(fā)育異常。新生子代鼠中pSES-SiBMP-4組出現(xiàn)癲癇，腸息肉及先天性巨結腸。
　　 結論：
　　 早期胚胎鼠跨胎盤定量RNA干擾現(xiàn)實可行，可建立穩(wěn)定的定量跨胎盤RNA干擾技術平臺。該方法可用來定量研究基因功能，構建基因下調模型動物。
　　 (1) RNAi質粒