神經(jīng)生長(zhǎng)因子活化PC-12細(xì)胞鈉離子電流及IRF-1的調(diào)控作用.pdf

1、目的：呼吸道合胞病毒(RSV)感染的肺內(nèi)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的表達(dá)顯著增強(qiáng),增加的NGF水平是否參與呼吸道合胞病毒感染后氣道神經(jīng)可塑性改變過程,目前還未完全明了。本實(shí)驗(yàn)通過神經(jīng)生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)類感覺神經(jīng)元細(xì)胞株大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC-12細(xì)胞)中Na+離子電流變化水平,以及干擾素調(diào)節(jié)因子-1(IRF-1)的調(diào)控作用來闡明RSV感染后氣道神經(jīng)可塑性的機(jī)制。
　　 方法：⑴用不同濃度的NGF(0ng/ml、50ng/ml及20

2、0ng/ml)刺激PC-12細(xì)胞,用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)不同濃度的NGF的刺激后的Na+電流密度(INa+)。⑵用不同濃度的神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF0ng/ml～200ng/ml)刺激PC-12細(xì)胞不同的時(shí)間,采用實(shí)施聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(Real-time PCR)檢測(cè)PC-12細(xì)胞中IRF-1mRNA表達(dá)變化。⑶將NGF及IFN-γ刺激的PC-12細(xì)胞分為四組,為NGF組、NGF+IFN-γ組、IFN-γ組及空白組,刺激2小時(shí)后,用蛋白質(zhì)印

3、跡技術(shù)(Western-bloting)來檢測(cè)不同組中PC-12細(xì)胞核蛋白中IRF-1的活化程度。⑷將干擾PC-12細(xì)胞分為三組,分別為空白組、陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組,用200ng/ml NGF分別刺激干擾后的PC12細(xì)胞2小時(shí),然后再用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)感染后的不同組中Na+電流密度和電流密度-電壓曲線。
　　 結(jié)果：①不同濃度的NGF刺激PC-12細(xì)胞后所檢測(cè)的Na+電流密度與不同濃度的NGF有濃度.電流密度依賴關(guān)系。②用不同

4、濃度的NGF刺激PC12細(xì)胞,當(dāng)NGF刺激的時(shí)間為2 h的時(shí)候,PC-12細(xì)胞中IRF-1mRNA表達(dá)最高。③用Western-bloting檢測(cè)不同組PC-12細(xì)胞中的IRF-1的表達(dá)時(shí),NGF、NGF+IFN-γ、IFN-γ分別與空白組相比較,均有體統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④在IRF-1被干擾后,用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)各組中PC-12細(xì)胞中Na+電流密度,空白組為(31.26±1.72 n=5)pA/pF,陰性對(duì)照組為(34.81±0.64 n

5、=5)pA/pF,實(shí)驗(yàn)組為(12.92±0.55 n=5)pA/Pf。在陰性對(duì)照組與空白組中的比較中,Na+電流密度無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而與空白組及陰性對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組中的Na+電流密度明顯受到抑制,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而I Na+I-V曲線,與實(shí)驗(yàn)組相比較,空白組及陰性對(duì)照組I-V曲線下移,但I(xiàn)Na+電壓依賴不變,對(duì)激活電位、峰值電位、及I-V曲線的形態(tài)軌跡無影響。
　　 結(jié)論：⑴NGF可以活化PC12細(xì)胞中Na+離子電流。⑵IRF-1