柴胡皂甙d治療狼瘡性腎炎的實驗研究.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種由多種因素引起機體免疫失調產生一系列自身抗體所導致的多系統(tǒng)、多器官受累的自身免疫性疾病，多見于育齡期女性，預后較差，嚴重危害人類健康。狼瘡性腎炎(lupusnephritis，LN)是SLE最常見的臨床表現(xiàn)，腎臟病變程度直接影響sLE的預后，LN及進行性腎功能損害是SLE的主要死亡原因之一。 LN的病因和發(fā)病機制尚不十分清楚，這為本病的根治帶

2、來困難。近年大量臨床觀察與實驗資料證明細胞因子的異常在LN發(fā)病過程中起重要作用。這些細胞因子包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉化生長因子-β(TGF-β)、干擾素-γ(IFN—γ)、白細胞介素2、4、6、10、12、18(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18)等。 對LN的研究除了臨床資料外，還有賴于對幾種自發(fā)性狼瘡小鼠模型的研究。其中新西蘭黑色品系(NZB)與新西蘭白色品系(NZW)雜交的子一代

3、NZBWF1白發(fā)狼瘡腎炎小鼠病變類似于人類的LN，因此常被作為人類LN的實驗研究模型。 LN的治療一直是醫(yī)學上的一大難題。目前糖皮質激素和細胞毒藥物仍為治療的首選藥物，LN的預后得到了顯著的改善，但是患者病情常常反復，難以控制，且長期、大量應用糖皮質激素和細胞毒藥物，不可避免出現(xiàn)毒副作用。因此，發(fā)掘新藥、探索新的治療方法以提高LN患者的生存率和改善其生活質量是目前亟待解決的問題。 中藥是我國醫(yī)學資源的一大寶庫，研究表明中

4、藥在機體免疫調節(jié)方面具有較大的優(yōu)點，近些年來國內一些學者對LN應用中藥進行了研究治療，結果顯示中藥對LN的治療在減少西藥毒副作用、降低復發(fā)率、提高療效等方面有很好的應用前景。而如能應用分子生物學方法，闡明中藥的作用機制，篩選有效藥物，必將使中醫(yī)藥治療LN的研究達到更高水平。 柴胡為常用中藥，柴胡皂甙d(Saikosaponin-d，SSd)是從柴胡中提取的主要活性成分，有糖皮質激素(GC)樣甾環(huán)結構，國內外很多研究表明其具有抗炎

5、、免疫調節(jié)作用，因此觀察SSd對LN的療效和探索其作用機理，具有重要的臨床意義。 研究目的: 本實驗擬應用從中藥柴胡中提取的活性成分SSd來治療NZBWF1小鼠，觀察動物尿排泄物、腎功能和血清皮質酮、血循環(huán)中自身抗體、腎組織病理改變以及腎組織中細胞因子表達等變化，在取得預期療效的基礎上，深入探討SSd對LN治療的作用機制，為SSd治療LN提供實驗和理論依據。 材料和方法: 雌性NZBWF1小鼠，18周齡，

6、20只，隨機分為3組，Ⅰ組(SSd治療1組，n=8，每天腹腔注射(ip)SSd，劑量0.2mg/100g體重，濃度0.2mg/ml)，Ⅱ組(SSd治療2組，n=6，每天ip SSd，劑量0.4mg/100g體重，濃度0.4mg/ml)，Ⅲ組(空白對照組，n=6，每天ip無菌生理鹽水1ml/100g體重)，共6周，每兩周取各組小鼠隨機尿，于實驗第6周末處死3組全部小鼠，取血及腎組織標本。用考馬斯亮藍法檢測小鼠尿蛋白，自動生化分析儀測定小鼠

7、血清肌酐(Cr)，酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)測定小鼠血清中抗ds-DNA抗體和皮質酮水平，對腎組織進行光鏡、電鏡和免疫熒光檢查以觀察腎組織學變化，并用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測細胞因子的變化，定期觀察小鼠的精神、活動、皮毛、體重等狀況。 結果: 與空白對照組相比，SSd治療組的尿蛋白含量，血清肌酐和抗ds—DNA抗體以及小鼠腎組織IL-6和IL-10 mRNA表達顯著降低，血清皮質酮水平顯著升高，差

8、異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；小鼠腎組織系膜增生、腎小球細胞增多，透明變性、腎小球硬化以及滲出得到改善，腎小管受損百分比降低，IgG、IgA以及IgM等形成的免疫復合物沉積減少，電鏡下沉積物減少，細胞增生減少，足突融合現(xiàn)象改善。小鼠體重有所增高。 結論: 1．SSd對NZBWF1小鼠LN有治療作用： (1)降低尿蛋白含量； (2)降低血清肌酐水平； (3)降低血清抗ds-DNA水平； (