冷凍干燥法制備1型糖尿病噬菌體展示疫苗.pdf

1、目前，疫苗保存常常采用冷凍干燥技術（Freeze-Drying）。冷凍干燥，也稱凍干。與液體劑型相比，凍干劑型能在環(huán)境溫度長期保持穩(wěn)定，因此，此技術被廣泛應用于生物制品領域。凍干后的樣品具有熱穩(wěn)定性高，活性物質不易氧化，運輸不依賴于冷鏈、保存期長、不易污染等優(yōu)點。然而，我們仍面臨如下問題：①近年來，隨著凍干技術的成熟，凍干人血清白蛋白（HSA）、角膜、酵母菌、乳酸菌培養(yǎng)基等技術已日臻成熟。迄今國內應用凍干技術制備的疫苗多為減毒活疫苗、活

2、菌菌苗、干擾素、轉移因子等。然而，凍干噬菌體展示疫苗尚未見報道。②在最短凍干周期內制備出高質量的樣品，凍干過程至關重要。這有賴于簡化的凍干曲線。升華干燥溫度高，可以大大縮短凍干周期。但有學者認為，升華溫度如果高于共晶點溫度（Te），會導致物料的融化崩解、疫苗凍干失敗、滴度明顯下降。③牛血清白蛋白（BSA）是一種蛋白類的保護劑，它廣泛地應用于凍干保護劑中。但是其潛在的血源性污染及它本身的抗原致敏問題，限制了它作為保護劑的應用。
　　

3、 為解決以上問題，我們此研究主要目的：①冷凍干燥法制備1型糖尿病噬菌體展示疫苗；②篩選1型糖尿病噬菌體展示疫苗保護劑，評價不含蛋白成分保護劑的保護效果；③簡化凍干曲線，高于共晶點溫度升華，縮短凍干周期。
　　 經正交試驗篩選，最佳保護劑配方為：海藻糖10.85％+甘氨酸17.37％（w/v）。最佳凍干曲線為：預凍溫度：-40℃預凍時間：4 hours降溫速度：1.5℃/minute；升華溫度：-15℃升華時間：5 hours升

4、華速度：1.5℃/minute；解析溫度：25℃解析時間：4 hours解析速度：1.5℃/minute；真空度：0.02mbar。
　　 本研究制備的1型糖尿病噬菌體展示疫苗凍干劑型，凍干前后疫苗滴度下降不超過0.5log值。篩選的保護劑，不含蛋白成分，保護效果良好。高于共晶點溫度升華，無融化崩解，其凍干周期明顯縮短，但其簡化凍干曲線后疫苗滴度并未顯著下降，與未經簡化組相比，無顯著性差異（P>0.05）。且凍干后樣品含水量<3