兒茶素對黑色素形成抑制效果初探.pdf

1、兒茶素是2-苯基苯并吡喃的衍生物，屬于黃烷醇類化合物。它大量存在于茶樹新稍中，占茶葉干重的12％-24％，是多酚類的主要成分，約為總量的70％-80％。根據(jù)結構不同，兒茶素分為表兒茶素(EC)、表沒食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。由于結構中具有連或鄰苯酚基，兒茶素具有良好的抗氧化能力，其相同物質(zhì)的量濃度的兒茶素抗氧化能力依次為L-EGCG>L-EGC>L-ECG>L-EC。黑色素

2、的過速增長或分布不均會造成皮膚局部過黑及色素沉著，從而產(chǎn)生雀斑、老年斑、黑斑病等病癥，影響美觀。酪氨酸酶(EC，1.14.18.1)又稱多酚氧化酶，是一種銅蛋白，其活性中心的雙核銅離子在酶催化中起重要作用，是黑色素生成的關鍵酶。隨著化妝品及藥品行業(yè)的發(fā)展，天然產(chǎn)物化妝品及藥品順應了回歸大自然的發(fā)展潮流和人們的消費需求，將成為化妝品及藥品開發(fā)中的主題。
　　 本文初步探討兒茶素對黑色素形成的影響，包括兒茶素對馬鈴薯酪氨酸酶活性的抑

3、制作用；兒茶素對蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用；EGCG對B16小鼠黑素瘤細胞的形態(tài)、細胞增殖率、酪氨酸酶活性及黑色素生成量的影響。取得結果如下：
　　 一、采用分光光度計法測定酶液加入量、底物濃度、溫度、pH值對酶活力的影響，確定最適反應條件。在30℃、pH6.8的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖體系中，采用酶動力學方法研究了兒茶素對馬鈴薯酪氨酸酶的抑制效應。結果表明：反應最適條件為酶液加入量0.5 mL、底物濃度2 mmol/

4、L、溫度30℃、pH6.8。兒茶素對馬鈴薯酪氨酸酶有抑制作用，抑制率達到50％的兒茶素質(zhì)量濃度(IC50)約為0.27 mg/mL；Lineweaver-Burk圖顯示兒茶素對馬鈴薯酪氨酸酶的抑制作用表現(xiàn)為競爭型抑制，抑制常數(shù)(K1)為0.16 mg/mL。
　　 二、在30℃，pH6.8的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖體系中，采用酶動力學方法研究了兒茶素對蘑菇酪氨酸酶單酚酶和二酚酶的抑制效應。結果表明，兒茶素對酪氨酸酶單酚

5、酶和二酚酶均有抑制作用，其半數(shù)抑制濃度(IC50)約分別為0.89 mg/mL和1.13 mg/mL；Lineweaver-Burk圖顯示兒茶素對二酚酶的抑制作用表現(xiàn)為競爭型抑制，抑制常數(shù)(K1)為0.53mg/mL。
　　 三、采用倒置顯微鏡觀察EGCG對B16細胞形態(tài)的影響，亞甲基藍法測定EGCG對B16細胞增殖率的影響，L-多巴氧化法測定EGCG對B16細胞酪氨酸酶活力的影響，氫氧化鈉裂解法測定EGCG對B16細胞黑色素生

6、成量的影響。結果表明：EGCG作用24 h，高濃度(>60μM)組細胞胞膜融合現(xiàn)象明顯；作用72 h，高濃度組大部分細胞死亡。EGCG對B16細胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑色素生成量均有顯著抑制，呈明顯的劑量效應關系；且EGCG抑制B16細胞增殖，IC50為33.99μM。
　　 以上研究表明，兒茶素具有抑制體外酪氨酸酶的作用，表現(xiàn)為競爭型抑制；EGCG能夠顯著抑制B16細胞形態(tài)、細胞增殖率、酪氨酸酶活性及黑色素生成量。兒茶素對抑