全甲基化EGCG類似物的設(shè)計(jì)合成及抗腫瘤MDR活性研究.pdf

1、腫瘤的多藥耐藥(MDR)是指一種藥物作用于腫瘤使之產(chǎn)生耐藥性后該腫瘤對(duì)未接觸過(guò)的、結(jié)構(gòu)無(wú)關(guān)、機(jī)制各異的多種抗腫瘤藥也具有交叉耐藥性的現(xiàn)象。腫瘤MDR產(chǎn)生的機(jī)制比較復(fù)雜,其主要機(jī)制之一是mdr基因編碼的P-糖蛋白(P-gp)的過(guò)表達(dá)。P-gp是一種相對(duì)分子質(zhì)量為170000u的跨膜糖蛋白,屬于ATP結(jié)合盒(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族成員之一。P-gp廣泛的分布于正常組織中,而P-gp在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)受藥物誘導(dǎo)。當(dāng)腫瘤細(xì)胞受到化療藥物作用時(shí),

2、作為一種保護(hù)性機(jī)制能特異性地使P-gp表達(dá)增高。P-gp蛋白是一種ATP依賴的藥物外排泵,通過(guò)ATP水解釋放的能量,主動(dòng)地將細(xì)胞內(nèi)的藥物外排到細(xì)胞外,從而降低細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物濃度低于殺傷濃度,而且這種泵出機(jī)制是非選擇性的。
　　 迄今為止,大多數(shù)研究中的腫瘤MDR逆轉(zhuǎn)劑都存在一定的缺點(diǎn),主要是與逆轉(zhuǎn)活性伴隨的內(nèi)在毒性過(guò)大(活性越高毒性越大),如心血管系統(tǒng)毒性、免疫抑制和腎毒性等,同時(shí)在耐受劑量下逆轉(zhuǎn)活性并不高。目

3、前開(kāi)發(fā)的P-gp抑制劑多數(shù)都是通過(guò),直接與P-gp上藥物結(jié)合位點(diǎn)作用,競(jìng)爭(zhēng)性或非競(jìng)爭(zhēng)性地抑制P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)藥物。但這些藥物都因?yàn)檫x擇性低、毒副作用大、結(jié)合能力差等缺點(diǎn),沒(méi)有在臨床應(yīng)用。
　　 EGCG是茶葉中茶多酚的最主要的活性成分,研究發(fā)現(xiàn)EGCG具有競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合P-gp結(jié)構(gòu)中的ATP酶結(jié)合位點(diǎn)逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥現(xiàn)象的作用。且有研究還發(fā)現(xiàn),全甲基化的EGCG能夠高效的抑制P-gp的外排作用?；贓GCG的上述特點(diǎn),我們課題組對(duì)EG

4、CG進(jìn)行了結(jié)構(gòu)改造,以期望獲得高效、低毒、特異結(jié)合P-gp的化合物。
　　 本課題組前期設(shè)計(jì)合成了6個(gè)EGCG類似物,其中化合物14,15在1μM濃度時(shí)P-gp相對(duì)逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(RF)分別為8.1,18.3,遠(yuǎn)高于對(duì)照維拉帕米(RF=4.2)。基于上述研究成果及文獻(xiàn)的報(bào)道,我們?cè)O(shè)計(jì)并半合成了6個(gè)全新的全甲基化EGCG的類似物,都經(jīng)過(guò)核磁共振氫譜、碳譜和質(zhì)譜驗(yàn)證。再合成兩個(gè)己報(bào)道化合物。包括對(duì)苯并吡喃環(huán)取代側(cè)鏈的延長(zhǎng)、不同官能團(tuán)取代、

5、變化取代基的位置?？疾烊谆腅GCG類似物的抗P-gp的活性與EGCG類化合物的結(jié)構(gòu)的關(guān)系。P-gp、BCRP、MRP活性測(cè)試顯示,其中化合物8,12在1μM濃度時(shí)P-gp的RF分別為12.1,9.8高于對(duì)照品維拉帕米。所有的化合物對(duì)BCRP、MRP均未表現(xiàn)出活性。本課題組希望通過(guò)本論文的研究為抗腫瘤MDR的藥物研究和應(yīng)用提供參考。
　　 本論文的具體內(nèi)容包括:第一,試驗(yàn)了文獻(xiàn)報(bào)道的對(duì)茶多酚粗提物衍生化再提取的方法,并對(duì)該方

6、法進(jìn)行優(yōu)化,對(duì)分離得到的乙酰化EGCG進(jìn)行再分離,提高乙?；疎GCG的純度,并且得到純的乙?；疎CG、乙?；疎GC及純的乙?；疎C；其次,以87％的收率和較簡(jiǎn)便的操作方法,得到了純的中間體甲氧基保護(hù)的EGC,這是合成EGCG類似物的最關(guān)鍵中間體；利用半合成方法合成8個(gè)全甲基化的EGCG類似物。第二:采用EDC做催化劑,室溫反應(yīng)的方法優(yōu)化了文獻(xiàn)中報(bào)道的EGCG類似物半合成的方法。第三:對(duì)合成的8個(gè)化合物進(jìn)行P-gp、BCRP、MRP活性測(cè)