HMGB1對心肌成纖維細胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白分泌的影響及意義.pdf

1、HMGB1是一種重要的損傷相關(guān)型細胞因子，廣泛存在于真核細胞的細胞核內(nèi)，與DNA相結(jié)合，在胞內(nèi)具有穩(wěn)定核小體，促進DNA彎曲便于基因轉(zhuǎn)錄的功能。而如果HMGB1釋放出胞外則可發(fā)揮多種生物學(xué)功能。主要是參與炎癥的反應(yīng)，可參與多種炎性疾病的發(fā)生發(fā)展。近期有研究發(fā)現(xiàn)心梗患者外周血HMGB1明顯增高，HMGB1與心梗后心臟重構(gòu)密切相關(guān)。心臟重構(gòu)主要是指心肌細胞肥大、非心肌細胞增生以及細胞外基質(zhì)的沉積導(dǎo)致的心臟大小、形狀、功能的改變。其中心肌間質(zhì)

2、的重構(gòu)（心肌成纖維細胞增殖和膠原纖維增生）起到了重要作用。
　　目的：
　　通過體外培養(yǎng)SD大鼠CFs，觀察HMGB1對CFs增殖、PCNA蛋白表達和Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白分泌的影響，探討HMGB1與心臟重構(gòu)的關(guān)系。
　　方法：
　　培養(yǎng)的新生SD大鼠CFs分為四組，分別給予濃度0(對照組)、0.01、0.1、和1mg/L的HMGB1干預(yù)，作用時間為6、12、18、24和48小時。
　　1.采用四氮唑鹽(MTT)

3、比色法檢測CFs增殖水平2.利用蛋白質(zhì)印跡法（WesternBlotting）檢測PCNA蛋白水平的變化。3.采用熒光實時定量PCR法檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達
　　結(jié)果：
　　1.與對照組相比，48小時后，HMGB1組新生SD大鼠CFs增殖水平及PCNA蛋白表達均明顯增高(p<0.05)；2.HMGB1對新生SD大鼠CFs的促增殖及升高PCNA蛋白表達的作用在較低濃度水平時呈濃度依賴性，在濃度為0.1mg/L時新生S

4、D大鼠CFs增殖水平及PCNA蛋白表達最高，超過該濃度后，其作用下降(p<0.05)；3.與對照組相比，48小時后，不同濃度的HMGB1組新生SD大鼠CFsⅠ、Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達水平均有所增高(p<0.05；4.Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達水平呈現(xiàn)對HMGB1在較低濃度水平呈依賴性增高.HMGB1濃度為0.1mg/L時CFs增殖水平和I、Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達水平最高。超過該濃度后，HMBG1的作用下降(p<0.05)。未發(fā)

5、現(xiàn)HMGB1的上述作用具有時間依賴性。
　　結(jié)論：
　　HMGB1能促進新生SD大鼠CFs增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達以及成纖維細胞PCNA表達水平的升高，其作用在低水平時呈濃度依賴性，并且濃度為0.1mg/L時效應(yīng)最明顯，超過0.1mg/L濃度后，HMGB1對細胞增殖的促進程度降低。本實驗結(jié)果證明了HMGB1在一定的濃度范圍之內(nèi)對心肌成纖維細胞存在著促增殖作用。但HMGB1是否在體內(nèi)發(fā)揮著同樣的作用有待進一步研究。