重組腺病毒介導多藥耐藥基因反義RNA逆轉人肝癌細胞株的MDR表型的實驗研究.pdf

1、四川大學博士學位論文重組腺病毒介導多藥耐藥基因反義RNA逆轉人肝癌細胞株的MDR表型的實驗研究姓名：李波申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：嚴律南20040506檢測腫瘤的體積變化和腫瘤抑制率。結果從人肝癌耐藥細胞株SMMC7721ADM提取的RNA進行RTPCR得到的擴增產物為609bp的片段，經DNA測序證實為mdrl基因片段。成功地構建了攜帶反義mdrl基因部分片段的重組腺病毒pAdEasyGFPASmdrl，重組腺病毒AdE

2、asyGFPASmdrl是2.5X109efuml。重組腺病毒對SMMC7721ADM細胞的生長和增殖沒有明顯影響在體外感染腺病毒pAdEasyGFPASmdrl后，與感染空白病毒pAdEasyGFP和未處理的SMMC7721ADM細胞相t匕，SMMC7721ADM細胞恢復了對化療藥物的敏感性，其對ADM和DNR的ICS。分別為0.44vgml和0.20LgmlRF分別是88和66.6，較耐藥細胞SMMC7721ADM下降了40倍和11

3、3.33倍。感染腺病毒24h后mdrlmRNA和Pgp的表達呈下降趨勢，對DNR的蓄積增加感染120h后與SMMC7721ADM細胞相比，mdrlmRNA表達顯著下降(P0.01)和Pgp的表達明顯減弱(P0.01)DNR的胞內濃度明顯增加(P0.05)。在裸鼠肝癌移植瘤模型中，三組的平均成瘤時間分別是19.7d.18.6d和20.2d成瘤率均為100%。給予ADM后，感染腺病毒AdEasyGFPASmdrl的移植瘤的體積增長慢于感染空

4、白病毒組和未處理細胞組，相對空白病毒和未處理細胞組的腫瘤抑制率為44.14%和41.59%.結論利用腺病毒載體系統(tǒng)AdEasy，可以快速而簡便獲得重組腺病毒。重組腺病毒介導的mdr1反義RNA無論在體內和體外均可以較好封閉人肝癌細胞株SMMC7721ADM的mdrl基因的表達，恢復對化療藥物的敏感性，可以部分逆轉MDR。為以mdrl為靶基因進一步進行肝癌基因治療的研究奠定了一定的實驗基礎。關鍵詞多藥耐藥多藥耐藥基因重組腺病毒反義RNA人