N-乙酰葡萄糖胺對皮膚角質形成細胞透明質酸合成的影響.pdf

1、背景和目的：透明質酸(Hyaluronic acid，HA)是天然存在于人體皮膚中的具有保水功能的聚合物，由葡糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺(又稱N-乙酰氨基葡萄糖，N-Acetylglucosamine，NAG)組成直鏈高分子多糖，作為吸水的大分子位于細胞外基質(Extracellular matrix，ECM)，廣泛存在于脊椎動物結締組織和某些細菌內。HA分子在溶液中高度伸展和隨機卷曲構型使其占有很大區(qū)域，其流體動力學體積較未水化時所占空

2、間大10倍，而且分子鏈之間相互纏繞形成連續(xù)的網狀結構，水分子通過極性鍵和氫鍵與其直接作用。使得HA像“分子海綿”一樣，可以吸收和保持其自身重量上千倍的水分，是國際上公認的最好的保濕劑之一，具有維持細胞外間隙，并促進離子溶質和營養(yǎng)物質的運輸。除此之外，HA還可與蛋白結合成為分子量更大的蛋白多糖分子，分布在結締組織中的蛋白多糖，通過氨基多糖與水結合，這種HA-蛋白質-水形成的凝膠將細胞粘合在一起，發(fā)揮正常的細胞代謝作用及組織保水作用，并保護

3、細胞不受病原菌侵害，防止感染，使皮膚具有一定的堅韌性和彈性。年青健康的皮膚與含水量高密切相關，隨著年齡的增長，皮膚中水分減少，進而彈性下降，光澤消退，皮膚粗糙衰老。研究表明真皮組織含水量與HA含量有直接關系。皮膚HA的含量在機體的器官中最高，占人體全部HA含量的50﹪。隨著對HA生理功能的深入研究，HA作為化妝品成分用于保養(yǎng)皮膚倍受重視。 皮膚中的HA主要由皮膚角質形成細胞和成纖維細胞產生，而NAG為HA合成原料之一，故本實驗

4、以構成人表皮的主要細胞角質形成細胞(Human epidermal keratinocytes-adult，HEKa)作為切入點，研究外源性NAG對HEKa細胞HA合成的影響，及探討NAG影響HEKa細胞HA合成的分子機制。方法：采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測不同濃度NAG對HEKa細胞增殖的影響：酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測不同濃度NAG對HEKa細胞HA合

5、成的影響；逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse transcription-polymerase chain raction，RT-PCR)測定NAG對HEKa細胞透明質酸合成酶(Hyaluronic acid synthetase．HAS)mRNA的影響，包括HAS1、HAS2和HAS3 mRNA，研究其作用的分子機制。 結果：MTT結果表明，低濃度的NAG(1mM/L、3mM/L和5mM/L)對HEKa細胞的增殖抑制無明顯影

6、響(P>0.05)，而10 mM/L的NAG顯著抑制HEKa細胞的增殖(P<0.05)；ELISA結果顯示，NAG呈劑量依賴性促進HEKa細胞HA的生成(P<0.01)，最佳濃度為5mM/L：RT-PCR結果顯示，NAG對細胞HAS1和HAS2mRNA的表達無明顯作用，而1mM/L 和 5mM/LNAG上調HAS3mRNA的表達，10mM/L的NAG對HAS3mRNA的表達無明顯影響。 結論：(1)不同濃度NAG作用于HEKa