耐鹽大豆培育分子策略的探討.pdf

1、大豆是主要的油料作物之一,而土壤鹽漬化和線蟲病嚴重抑制了大豆的生長和發(fā)育,因此,培育耐鹽抗線蟲大豆新品種對提高大豆產(chǎn)量無疑將產(chǎn)生重要影響。本文的目的是利用農(nóng)桿菌介導的大豆胚尖高效遺傳轉化方法,將分別來自三種耐鹽性不同的植物的與陰離子清除有關的甲基轉移酶基因導入大豆中,以期為植物基因工程探索出一條新途徑,同時為大豆的遺傳育種提供新資料。 ⑴對大豆的滅菌方法、外植體的優(yōu)化、分化和拔高培養(yǎng)基的優(yōu)化、生根培養(yǎng)基及生根方法等進行了探索,以

2、建立大豆胚尖高效再生體系；對大豆遺傳轉化過程中的重要因素如篩選壓、菌液濃度、浸染時間、農(nóng)桿菌抑制劑的使用等進行了研究：分別將來自擬南芥、鹽芥和鹽地堿蓬的甲基轉移酶基因MCT利用農(nóng)桿菌介導的方法導入大豆中,并利用PCR、RT-PCR、Southern雜交等分子手段對轉化子進行了檢測。 ⑵建立了大豆胚尖高效再生體系：成熟大豆種子浸泡24h后,用1:1的1.2％的次氯酸鈉和0.1％的升汞混合液處理大豆10min,收集胚尖并轉入芽誘導分

3、化培養(yǎng)基MS+0.08 mg/L TDZ,30d后將長有叢生芽的胚尖轉入拔高培養(yǎng)基MS+2.0mg/L KT+0.2 mg/L NAA中,20d后切取苗高大于5cm的植株,轉入生根培養(yǎng)基1/2MS+0.5mg/LNAA中,30d后待根長到3-4cm后移栽到培養(yǎng)土中；優(yōu)化了大豆胚尖遺傳轉化體系：卡那霉素選擇濃度為90mg/L,菌液濃度為OD600=0.6,浸染時間為12h,可用氨芐青霉素作為農(nóng)桿菌的抑制劑；AtMCT、ThMCT和SsMC