流產嗜衣原體AlphaLISA檢測方法研究.pdf

1、流產嗜衣原體感染是能引起羊、牛、豬等多種動物流產，產下死胎或弱胎的主要原因。作為人獸共患病病原，懷孕婦女與帶病動物接觸后會導致流產現象的發(fā)生。危及公共衛(wèi)生安全及造成照成畜牧業(yè)經濟的重大損失。流產嗜衣原體傳統(tǒng)檢測方法包括：分子生物學檢測法、直接涂片染色法、補體結合實驗，酶聯免疫吸附實驗等。但是傳統(tǒng)方法這些方法存在各種缺陷：感染風險、靈敏度不夠高、操作步驟繁瑣、檢測時間長等。
　　AlphaLISA是基于近距離能量共振的原理發(fā)展起來的

2、一種新型的檢測技術，通過抗原抗體的相互作用形成供體磁珠-抗原-抗體-受體磁珠復合物，在680nm的激光作用下發(fā)生熒光共振能力轉移（FRET），釋放單體氧分子作用于受體微珠，于615nm處出現發(fā)射光波。與傳統(tǒng)ELISA方法相比,AlphaLISA技術具有以下優(yōu)勢：操作簡便、全程無需洗板、精確度高、靈敏度高、樣本需求量小、高通量等。隨著檢測技術的發(fā)展，AlphaLISA技術在病毒性疾病的快速檢測等方面，具有巨大應用前景,有進一步取代傳統(tǒng)EL

3、ISA方法的趨勢。
　　本研究通過對流產嗜衣原體流行病學的研究，利用基因工程方法，重組表達了流產嗜衣原體外膜主蛋白（MOMP）；利用提純的流產嗜衣原體細胞培養(yǎng)上清,免疫BALB/C小鼠，制備單克隆抗體；利用重組表達的流產嗜衣原體外膜主蛋白、樣品血清中的抗體及單克隆抗體之間的相互作用，建立了競爭性AlphaLISA檢測方法。
　　研究結果：對流產嗜衣原體MOMP成功的進行了原核表達，經Western blot驗證后，重組表達的

4、MOMP蛋白能與制備的針對MOMP蛋白的單克隆抗體發(fā)生特異性反應；通過細胞融合，制備了抗流產嗜衣原體的單克隆抗體；根據競爭法檢測原理，建立了流產嗜衣原體AlphaLISA檢測方法。根據流行病學診斷實驗的評價標準，以商業(yè)化試劑盒檢測作為標準，計算所建立的AlphaLISA檢測方法的靈敏度、特異性、正確指數、陽性似然比，陰性似然比，綜合積分指數等，以此來評價所建立的流產嗜衣原體AlphaLISA檢測方法。結果表明：該方法靈敏度為0.375u