上轉換納米介導的光動力療法體外殺傷脊髓星形膠質細胞的實驗研究.pdf

1、目的:探討以上轉換熒光納米顆粒為載體與光敏劑部花青540連接的納米復合物(UCNPs-MC540)介導的光動力對大鼠脊髓星形膠質細胞的體外殺傷效應。
　　方法:(1)于無菌條件下體外分離新生1-2天的SD大鼠脊髓組織，制成細胞懸液，通過差速貼壁和恒溫搖床震蕩去除雜細胞，進行傳代、培養(yǎng)。利用膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細胞化學染色法鑒定脊髓星形膠質細胞。(2)成功分離提純大鼠脊髓星形膠質細胞后，采用MTT法檢測不同濃度UCNPs

2、-MC540復合物，不同能量980納米波長近紅外激光照射對細胞活力的影響以及UCNPs-MC540聯合980納米近紅外激光的光動力療法的細胞殺傷效應;最后用透射電鏡觀察在200μg/ml UCNPs-MC540復合物濃度與近紅外980納米激光2000J/cm2能量照射下，星形膠質細胞細胞結構的改變。
　　結果:(1)體外分離培養(yǎng)的細胞具有典型的星形膠質細胞的形態(tài)，膠質纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色陽性，證實為星形膠質細胞。(

3、2)在不同濃度UCNPs-MC540(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)與星形膠質細胞共培養(yǎng)后，細胞存活率的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);不同能量(0J/cm2、200 J/cm2、500 J/cm2、1000 J/cm2、2000 J/cm2)980納米近紅外激光照射體外培養(yǎng)的星形膠質細胞后，細胞存活率的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);不同濃度UCNPs-MC540與星形膠質細胞共

4、培養(yǎng)12小時后給予2000J/cm2980納米近紅外激光照射，細胞存活率隨著UCNPs-MC540濃度的增加而降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);在UCNPs-MC540濃度為100μg/ml與細胞共培養(yǎng)12小時后分別給予不同能量激光照射，隨著激光劑量的增加，細胞存活率下降，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3)與空白對照組相比，在濃度為200μg/mlUCNPs-MC540復合物介導的光動力作用下，細胞呈現典型的凋亡樣改變

5、，線粒體受累，染色質凝聚邊移，胞膜皺縮等改變。
　　結論:(1)新生SD大鼠的脊髓星形膠質細胞成功在體外分離，培養(yǎng)，傳代及鑒定。(2)以上轉換熒光納米為載藥體，聯合光敏劑部花青540構建的納米復合物UCNPs-MC540介導的光動力療法對脊髓星形膠質細胞具有一定的體外殺傷效果，為今后脊髓損傷后抑制星形膠質細胞的增生，減少膠質瘢痕形成的治療拓展了新的思路和方法。單純給予納米光敏復合物或單純進行光照則無細胞殺傷效果，在一定程度上提示U