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文檔簡介
1、目的:通過整體動物和體外細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),從整體動物、組織、細(xì)胞和分子生物學(xué)的不同水平,觀察中藥健腦顆粒對腦動脈硬化的防治及對受損神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用,并初步探索其作用機(jī)理。
方法:
1.采用高血壓合并高血脂法復(fù)制大鼠腦動脈硬化模型:以雙腎雙夾法制備腎性高血壓模型、再喂飼高脂飼料制成高血壓合并高血脂大鼠腦動脈硬化模型,觀察血壓、血脂,血漿NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1。水平等的變化,結(jié)合腦血管及腦組
2、織病理形態(tài)學(xué)檢查作為確認(rèn)模型形成的綜合觀測指標(biāo)。
2.取上述腦動脈硬化模型大鼠,隨機(jī)分為模型對照組、陽性藥(桂利嗪)對照組及健腦顆粒治療給藥和預(yù)防給藥的大、小劑量組,另設(shè)偽手術(shù)對照組作為正常對照。造模給藥14周后,檢測并記錄各組大鼠的血壓、心率、腦血流,分別測定血清抗氧化水平(SOD、MDA、GSH-PX)、脂質(zhì)水平(TC、TG、HDL-C、LDL-C)等相關(guān)指標(biāo)及血漿中NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1。等的含
3、量,觀察腦指數(shù)、腦含水量的變化,同時(shí)測定腦組織中NO、ET含量及其抗氧化水平(SOD、MDA、GSH-PX),并用原位雜交法觀察用藥后對腦神經(jīng)細(xì)胞iNOS mRNA、ET-1 mRNA表達(dá)的影響,對腦血管及腦組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)檢查,觀測對腦血管、腦組織損傷的保護(hù)與修復(fù)作用。
3.采用低糖DMEM培養(yǎng)液建立PC12細(xì)胞的低糖模型、連二亞硫酸鈉造成PC12細(xì)胞缺氧損傷模型、H2O2造成PC12細(xì)胞自由基損傷模型,分別給予健腦顆
4、粒各濃度藥液及大、中、小灌胃劑量的含藥血清進(jìn)行干預(yù),觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,測定各組上清LDH活力,并用MTT法測定細(xì)胞活力。
4.采用灌胃給藥法進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn),初步評價(jià)其安全性。
結(jié)果:
1.使用高血壓合并高血脂法成功建立大鼠腦動脈硬化模型,模型大鼠的血壓、血脂明顯升高,ET/NO、TXB2/6-Keto-PGF1。比值也明顯上升,且腦血管及腦組織病理形態(tài)學(xué)檢查與患者的臨床病理改變相仿
5、。
2.整體動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:健腦顆粒治療給藥和預(yù)防給藥大、小劑量組均能顯著降低腦動脈硬化大鼠的收縮壓、舒張壓和平均動脈壓,減緩心率,明顯提高模型大鼠的腦血流量;降低血漿ET/NO,TXB2/6-Keto-PGF1。比值,降低血清總膽固醇含量及LDL-C/HDL-C比值;明顯提高血清SOD和GSH-PX活力,同時(shí)降低MDA含量;能明顯降低腦指數(shù)、腦含水量及腦組織中NO、ET含量,降低腦神經(jīng)細(xì)胞iNOSmRNA、ET-1 m
6、RNA的表達(dá);對腦組織抗氧化水平也能有所改善;病理形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果表明健腦顆粒能明顯抑制腦組織缺血性病變和腦血管動脈硬化癥狀的形成,這些可能是健腦顆粒治療腦動脈硬化癥的主要作用機(jī)理。
3.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:缺糖、缺氧、自由基損傷后的PC12細(xì)胞活力下降,LDH活力明顯增高;健腦顆粒藥液及含藥血清可使細(xì)胞活力增強(qiáng),LDH活力降低;形態(tài)學(xué)觀察也證實(shí),給予健腦顆粒藥液或含藥血清能明顯減輕缺糖、缺氧、自由基損傷的PC12細(xì)胞形態(tài)學(xué)的
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