蛋白水解誘導因子核心肽mRNA在食管癌組織中的表達.pdf

1、目的：
　　 惡病質是一種以短期內體重下降，脂肪和肌肉群進行性消耗為特征，即出現(xiàn)碳水化合物、脂質和蛋白質代謝的變化，同時伴有厭食、貧血、浮腫、衰竭等表現(xiàn)的綜合征。引發(fā)惡病質的具體機制不是很清楚。大多數進展期惡性腫瘤的普遍表現(xiàn)是癌性惡病質的發(fā)生發(fā)展，它是這些疾病死亡的一個重要的獨立因素。在惡病質病人中，骨骼肌萎縮是由于蛋白代謝增加和蛋白合成的減少，兩種情況可能同時發(fā)生，從而造成嚴重的肌肉萎。引發(fā)惡病質的具體機制不是很清楚。在癌性惡

2、病質中組織代謝所涉及的因子，包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，白細胞介素-1(IL-1)，白介素-6(IL-6)，干擾素-γ(IFN-γ)，脂解因子鋅 α2-糖蛋白，腫瘤特殊產物。但有研究顯示血清中TNF-α、IL-1、IL-6和IFN-γ都與患有進展期和終末期癌癥的病人的體重減輕無明確聯(lián)系。蛋白水解誘導因子(proteolysis-inducing factor，PIF)，一種與惡病質病人的體重減輕有關的因子。最開始從MAC16腫瘤

3、模型中分離，人類PIF的同系物隨后在體重減輕的惡病質病人的尿液中檢出。在體內和體外，PIF都可以引起骨骼肌的蛋白水解。PIF為糖基化的蛋白，分子量約為24kDa，包括一段4kDa的核心肽和碳水化合物殘基。一些胃腸道的腫瘤和腫瘤細胞系過量表達PIF蛋白。
　　 人類來源的PIF定義為人類惡病質相關蛋白(HCAP)，在前列腺癌患者檢測出它的表達。實驗證明僅在前列腺癌細胞系中檢測出HCAPmRNA的表達，而在間質組織中沒有表達。把這些

4、癌細胞植入小鼠體內，小鼠的體重減輕明顯和HCAPmRNA的表達有關。PIF核心肽的基因定位于12號染色體(12q13.1)，并于正常皮膚、乳腺和腦組織以及源于原發(fā)和轉移腫瘤的各種癌細胞中鑒定出它的轉錄物。本研究主要通過半定量RI-PCR的方法，檢測PIF-CP mRNA在食管鱗狀細胞癌腫瘤組織、癌旁組織以及正常組織中的表達情況以及PIF-CP mRNA的表達與腫
　　 方法
　　 提取60例食管癌患者腫瘤組織和癌旁組織的

5、總RNA，同時提取11例食管良性疾病患者的正常食管組織的總RNA。通過測量RNA純度及濃度，用半定量RT-PCR的方法檢測PIF核心肽基因mRNA在食管鱗狀細胞癌腫瘤組織癌旁組織以及食管良性疾病手術切除的正常食管組織的表達。根據Genbank人類來源的PIF基因序列(AY590150)設計特異性引物，取10μlPCR產物經1.2％瓊脂糖凝膠電泳，GeneFander染色鑒定，凝膠成像分析系統(tǒng)進行拍照、分析。通過軟件測量灰度值。以PIF-

6、CP與β-actin之比，作為PIF-CP mRNA的相對的表達量。
　　 結果
　　 用半定量RT-PCR的方法，檢測食管癌患者腫瘤組織和癌旁組織及食管良性疾病患者手術切除的正常食道組織的PIF-CP基因的mRNA表達，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織與癌旁組織中表達水平無明顯差異(P>0.05)。盡管在正常組織中也檢測出PIF-CPmRNA的表達，但是與腫瘤患者的腫瘤組織和癌旁組織相比表達的水平非常低(P<0.05)。PIF-CP基因m