表皮生長因子誘導(dǎo)人口腔鱗癌細胞整合素β6基因表達的機制研究.pdf

1、研究目的：
　　近年來研究發(fā)現(xiàn)表皮生長因子（Epidermal Growth Factor，EGF）與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，這些生物學(xué)作用與整合素αVβ6有重疊。在健康成體的上皮組織中整合素αVβ6不表達，但在創(chuàng)傷愈合及腫瘤生長過程中呈上調(diào)表達。在人口腔鱗癌組織中整合素αVβ6高表達，并且EGF能夠誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移，但是目前尚不清楚EGF是否能夠誘導(dǎo)整合素αVβ6的表達導(dǎo)致口腔鱗癌細胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。整合素αVβ6是

2、由αV亞基和β6（ITGB6）亞基組成的跨膜異二聚體，只特異的在上皮組織中表達，β6亞基是調(diào)控整個異二聚體αVβ6表達的關(guān)鍵性亞基。因此，本研究主要探討EGF是否能夠誘導(dǎo)人口腔鱗癌SAS細胞中ITGB6基因的表達，并對參與調(diào)控口腔鱗癌細胞中ITGB6基因轉(zhuǎn)錄活性的轉(zhuǎn)錄因子進行研究。
　　材料和方法:
　　利用實時熒光定量PCR（Quantitative Real-Time PCR，qRT-PCR）技術(shù)和蛋白質(zhì)免疫沉淀（Wes

3、tern Blot）技術(shù)檢測EGF對人口腔鱗癌SAS細胞中ITGB6 mRNA和蛋白質(zhì)表達水平的影響，并用mRNA stability實驗檢測ITGB6 mRNA表達是否與mRNA穩(wěn)定性有關(guān)；利用含有ITGB6基因5’側(cè)翼區(qū)不同長度片斷的熒光素酶報告基因質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染SAS細胞，確定EGF調(diào)控SAS細胞中ITGB6基因轉(zhuǎn)錄活性的主要調(diào)控區(qū)；利用生物信息學(xué)方法并結(jié)合相關(guān)文獻報道預(yù)測EGF調(diào)控SAS細胞ITGB6基因轉(zhuǎn)錄活性的可能順式作用元件及

4、與之結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子；利用定點突變、染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）和RNA干擾實驗方法確定STAT3轉(zhuǎn)錄因子參與EGF誘導(dǎo)SAS細胞中ITGB6基因的表達；最后利用蛋白質(zhì)免疫沉淀法檢測SAS細胞中EGF對轉(zhuǎn)錄因子STAT3表達量的影響。
　　結(jié)果:
　　1. EGF誘導(dǎo)SAS細胞后，ITGB6 mRNA及蛋白質(zhì)的表達量顯著增加。
　　2. EGF調(diào)控SAS細胞中ITGB6基因轉(zhuǎn)錄活性的主要調(diào)控區(qū)位于ITGB6基因5’側(cè)翼區(qū)

5、的-150~-421區(qū)域，該區(qū)域含有可能參與EGF誘導(dǎo)SAS細胞中ITGB6基因的轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子潛在結(jié)合位點。
　　3.利用定點突變、染色質(zhì)免疫共沉淀方法和RNA干擾實驗確定轉(zhuǎn)錄因子STAT3參與EGF誘導(dǎo)SAS細胞中ITGB6基因的表達，而且EGF可以活化SAS細胞中STAT3轉(zhuǎn)錄因子。
　　結(jié)論：
　　1. EGF可以誘導(dǎo)ITGB6 mRNA和蛋白質(zhì)在人口腔鱗癌SAS細胞中表達。
　　2. EGF能夠