尼克酰胺對腎癌細胞的影響及其分子機制的研究.pdf

1、背景及目的:
　　腎細胞癌(簡稱腎癌)是常見的惡性腫瘤之一，約占腎臟腫瘤的90％~95%，其發(fā)病率在泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于膀胱癌。腎癌侵襲和轉移能力強，且對化、放療及傳統(tǒng)免疫治療均不敏感，患者預后較差，故對腎癌治療藥物的研究已經成為一項熱門課題。研究表明尼克酰胺在腫瘤中有抑制腫瘤細胞的增殖等重要作用，而尼克酰胺對腎癌作用目前國內的研究少有報道。本研究探討尼克酰胺對腎癌786-0細胞的增殖、相關蛋白表達、細胞凋亡及其侵襲和遷移作用

2、的影響，為臨床上尼克酰胺成為治療腎癌的新型抗腫瘤藥物提供新的科學依據。
　　材料和方法:
　　1.用含10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人腎癌768-0細胞株。
　　2.將細胞用0.25%的胰酶消化，以每孔80000個細胞接種于3個12孔板上。每個孔約l mL培養(yǎng)液并且分為含有尼克酰胺的終濃度為10、20、30 mmol／L組，以未處理細胞為對照組，待融合度到70%-80%時

3、候開始處理細胞，分別于12、24、48 h進行細胞計數。計算原細胞懸液的細胞數：(細胞密度)：(細胞懸液的細胞數）/mL＝（4個大格子細胞數/4)×104×稀釋倍數。
　　3.將生長狀態(tài)良好的786-0細胞接種至12孔培養(yǎng)板，在含10%胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h，待細胞長至70%~80%時，更換10%胎牛血清的培養(yǎng)基，同時分別加入10、20、30 mmol／L濃度的尼克酰胺繼續(xù)培養(yǎng)24 h，以未處理細胞為對照組。收集細胞，利用

4、AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法細胞凋亡檢測試劑盒染色，用流式細胞儀進行檢測細胞凋亡。
　　4.細胞接種于10cm培養(yǎng)皿中，待融合度到70%-80%時候開始加藥，用含不同濃度(10、20、30mmol／L)尼克酰胺處理腎癌768-0細胞24h，以未處理細胞為對照組，用Western Blot檢測SIRT1蛋白及p53蛋白的表達量。
　　5.細胞接種于6cm培養(yǎng)皿中，待融合度到70%-80%時候開始加藥，用含不同濃度(1

5、0、20、30mmol／L)尼克酰胺處理腎癌768-0細胞24h，以未處理細胞為對照組，用transwell和BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測尼克酰胺對腎癌768-0細胞遷移、侵襲的影響。
　　6.實驗數據分析和處理：用GraphPad Prism5.0軟件，所有數據均使用單因素方差分析的Newman-Keul's檢驗進行統(tǒng)計學分析。
　　實驗結果:
　　1.尼克酰胺抑制腎癌786-