布洛芬對肝癌細胞HepG2增殖、凋亡及wnt-β-catenin信號通路的影響的研究.pdf

1、目的：用非甾體類抗炎藥布洛芬作用于肝癌細胞HepG2，觀察其細胞增殖、凋亡的變化，并從分子水平研究布洛芬對肝癌細胞HepG2細胞的wnt/β-catenin信號通路的關鍵蛋白β-catenin及下游重要靶基因cyclin D1、c-myc的影響，探討布洛芬抑制肝癌的可能分子機制，從而為臨床上進一步應用此藥物治療肝癌奠定基礎。 方法：體外培養(yǎng)HepG2細胞，以MTT法檢測不同濃度布洛芬分別作用HepG2細胞24、48、96h后細胞

2、增殖情況；應用RT-PCR檢測布洛芬處理HepG248h后β-catenin、cyclin D1、c-myc轉錄水平的變化；westernblotting檢測布洛芬對HepG2中β-catenin蛋白表達量的影響；免疫細胞化學法觀察布洛芬處理HepG2細胞后β-catenin的亞細胞定位；流式細胞儀檢測布洛芬對HepG2細胞凋亡的影響。 結果：0.7 mmol/L的布洛芬處理細胞48h后能明顯見到細胞增殖受到抑制，抑制率達到53

3、.8％±1.56％；RT-PCR結果顯示布洛芬處理后細胞的β-catenin、cyclin D1、c-myc轉錄也受到顯著抑制；Western印跡結果表明布洛芬處理組細胞中β-catenin蛋白表達低于未處理組；免疫細胞化學結果顯示未處理組的β-catenin在細胞中主要定位于胞核，而布洛芬處理后β-catenin在胞核中定位減少，胞漿定位增多；流式細胞術結果顯示布洛芬能誘導HepG2細胞凋亡。上述作用都有時間和劑量依賴性。 結

4、論：1.布洛芬能顯著抑制肝癌細胞HepG2的增殖，誘導其凋亡，且隨著處理時間和藥物濃度的增加，這種作用逐漸增強；2.布洛芬能影響肝癌細胞HepG2的形態(tài)，改變其貼壁屬性，下調(diào)β-catenin基因和蛋白的表達，改變β-catenin的亞細胞定位，下調(diào)wnt/β-catenin信號通路下游重要靶基因cyclin D1、c-myc的轉錄；3.布洛芬引起肝癌細胞HepG2的的增殖與凋亡的改變可能與調(diào)控wnt/β-catenin信號通路，抑制下