肝組織端粒酶、Cyclin D1 mRNA在微囊化肝細胞移植治療急性肝衰竭大鼠模型中的動態(tài)變化.pdf

1、目的： 本實驗將微囊化肝細胞移植入急性肝衰竭(Acuteliverfailure，ALF)大鼠腹腔內(nèi)，檢測觀察大鼠肝功能和肝組織中端粒酶、CyclinDlmRNA的動態(tài)變化，初步研究微囊化肝細胞腹腔移植后肝衰竭大鼠肝細胞的增殖情況及肝組織中端粒酶、CyclinDlmRNA的變化和意義。 方法： 1.用Seglen改良二步胰酶灌注法對健康大鼠肝臟進行肝細胞分離及純化，與2.0％海藻酸鈉等材料混勻，在自制裝置下制備微

2、囊化肝細胞。 2.隨機將雄性成年SD大鼠分成正常對照組和造模組。造模組大鼠通過腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)，建立急性肝衰竭大鼠模型，將造模動物隨機分成3組：Ⅰ組為ALF模型組；Ⅱ組為裸肝細胞移植組，于造模后18小時腹腔內(nèi)植入游離同種異體肝細胞；Ⅲ組為微囊化肝細胞移植組，于造模后18小時腹腔內(nèi)植入微囊化同種異體肝細胞。造模后24h、48h、72h、120h、168h分別從各組中隨機取8只大鼠(Ⅰ組尚需觀察6h、12h)，

3、留門靜脈血觀察肝功能變化，取肝組織用半定量RT-PCR方法檢測端粒酶、CyclinDlmRNA的動態(tài)變化。 結(jié)果： 1.每只大鼠分離純化后所得肝細胞經(jīng)0.4％臺盼藍染色判斷細胞產(chǎn)量可達5×107以上，率達90％以上。在自制裝置下制備微囊化肝細胞，經(jīng)0.4％臺盼藍染色后85％以上肝細胞成活，微囊大小在400μm-800μm之間。 2.模型建立24h后，大鼠表現(xiàn)為極度虛弱、食欲明顯減退、嗜睡、抽搐、昏迷等。肝病理學表

4、現(xiàn)為肝細胞壞死廣泛而嚴重，出現(xiàn)彌漫性的大片壞死，細胞溶解，肝索解離，小葉結(jié)構(gòu)模糊不清，肝竇明顯擴張并出血，小葉內(nèi)及匯管區(qū)有淋巴細胞和巨噬細胞為主的炎癥細胞浸潤，殘存肝細胞水腫變性，這表明急性肝功能衰竭動物模型成功建立。 3.各組大鼠肝功能檢驗發(fā)現(xiàn)，造模后6h，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)均已顯著升高(P＜0.05)，以48～72h之間為著。48h開始，Ⅱ、Ⅲ組ALT、AST較Ⅰ組明顯下降(P＜0.0

5、5)。Ⅲ組在48、72h時肝功能下降較Ⅱ組明顯(P＜0.05)。另外TBiL在Ⅰ組造模后逐漸升高，72h達最高峰，Ⅱ、Ⅲ組與Ⅰ組相比，48h、72h、120h均明顯下降(P＜0.05)，其中在48h、72hⅢ組較Ⅱ組下降更明顯(P＜0.05)。模型組、裸肝組和微囊組大鼠生存率分別是26.7％(4/15)、40.0％(6/15)、73.3％(11/15)，微囊組較模型組、裸肝組大鼠生存率有顯著性提高(P＜0.05)。 4.Ⅱ、Ⅲ組

6、端粒酶、CyclinDlmRNA均在72h、120h和168h較Ⅰ組有明顯升高(P＜0.05)，Ⅲ組端粒酶、CyclinDlmRNA在120h和168h均較Ⅱ組有明顯升高(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.腹腔注射D-GalN1.4g/kg一次性造模成功，大鼠狀態(tài)、死亡率、肝臟組織學及生化學改變符合ALF。 2.Seglen改良二步胰酶灌注法對健康大鼠肝臟進行肝細胞分離及純化，所得肝細胞產(chǎn)量及活率符合HCT的要求。肝