谷氨酸轉運體GLAST在小鼠視網膜興奮性損傷后的表達.pdf

1、目的:本實驗在NMDA(N-甲基-D天門冬氨酸)所致小鼠視網膜興奮性損傷中,觀察谷氨酸轉運體GLAST的蛋白表達量和mRNA隨時間表達量的變化,探討GLAST對神經節(jié)細胞凋亡的作用。
　　 方法:本實驗采用健康清潔級4-8周齡C57BL/6J小鼠共54只,雌雄各半,體重約20-30g,隨機分成A、B、C三組,A組6只為正常對照組,B、C為實驗組各24只,其中B組為NMDA興奮性損傷組,C組為空白對照組。B組、C組于造模后6h、2

2、4h、3d和7d四個時間點處死。處死前對每組小鼠進行暗適應,至少暗適應6小時,然后進行視網膜電生理(ERG)檢查。ERG操作完畢處死動物,取每只小鼠左眼眼球做病理切片,進行HE染色、免疫組織化學及TUNEL凋亡細胞染色,右眼眼球取完整視網膜用Taqman熒光定量RT-PCR法檢測視網膜中谷氨酸轉運體GLASTmRNA隨時間表達變化,以及與正常組比較表達差異。
　　 結果1、HE染色:(1) NMDA興奮性損傷組:造模后6h,與正

3、常對照組比較未見明顯差異,造模后24h,視網膜的神經節(jié)細胞層開始出現(xiàn)凋亡形態(tài)細胞,3d凋亡細胞增多并且神經節(jié)細胞數(shù)目逐漸減少,7d興奮性損傷組神經節(jié)細胞的數(shù)目更少,而且內叢狀層變薄,與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(2) PBS空白對照組:與正常對照組比較四個時間點均未見明顯異常,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 2、視網膜電生理(ERG)檢查:造模后3、7天,(1)NMDA實驗組:與正常對照組比較,在標準

4、混合反應中b波波幅顯著下降,差異顯著有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(2) PBS空白對照組:與正常組比較沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　 3、TUNEL凋亡細胞染色:(1) NMDA實驗組:四組神經節(jié)細胞層都可以見到紅染的凋亡細胞,24h組凋亡細胞數(shù)量最多,與正常組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(2) PBS空白對照組:偶見少量凋亡細胞,與正常組比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 4、免疫組織化學:三組中

5、都能見到GLAST蛋白的表達,正常組與PBS組可見GALST蛋白分布在視網膜全層,且主要分布在內外叢狀層。NMDA組:四個時間點GLAST蛋白表達都明顯減少。3、7d組能見到GALST蛋白在內叢狀層、神經節(jié)細胞層的濃度要明顯高于其他各層。
　　 5、Taqman法熒光定量RT-PCR:(1)NMDA組:與正常組比較GLAST的mRNA表達顯著下調,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(2) PBS組:與正常組比較未見明顯差別。<