安徽碭山地區(qū)梨種質(zhì)資源的AFLP研究.pdf

1、安徽碭山地區(qū)梨資源豐富，碭山酥梨在世界水果市場占據(jù)重要地位。由于梨種內(nèi)變化大，加上種間的雜交，使碭山地區(qū)梨在長期的進化和栽培中形成了豐富的資源類型。對碭山地區(qū)梨種質(zhì)資源進行研究，進行資源類型的鑒定，探討品種間的親源關(guān)系。以達到合理利用這些資源，對加快梨育種進程有重要意義。 AFLP(擴增長度片段多態(tài)性)是一種新的DNA分子標記技術(shù)，具有高效、穩(wěn)定、可靠的特點。通過對影響AFLP技術(shù)體系的各主要因素的研究，建立了適于碭山酥梨AFL

2、P分析的技術(shù)體系：酶切體系25μL，總體積中含純化后的DNA500ng；EcoRI和MseI各3U，分步進行酶切；酶切完成后加入連接液，16℃連接過夜(8～12h)；連接產(chǎn)物稀釋10倍用于預(yù)擴增；預(yù)擴增產(chǎn)物稀釋10倍用于選擇性擴增；擴增產(chǎn)物加入等體積的上樣緩沖液，95℃變性5min后，在6％變性聚丙烯酰胺上恒功率(70W)進行電泳，然后進行銀染顯色。 本研究利用確立的AFLP技術(shù)體系對碭山地區(qū)的27個梨資源類型進行了遺傳多樣性分

3、析評價和芽變鑒定，運用3對選擇性擴增引物組合進行擴增，每對引物產(chǎn)生的帶紋都相當(dāng)豐富，每個泳道有50條以上清晰的條帶，擴增片段DNA的長度30bp-600bp。3對引物共擴增出清晰可靠的DNA譜帶180條，平均每對引物擴增出60條。其中166條為多態(tài)性帶，平均多態(tài)性比率為92.2％，多態(tài)性最高的為引物組合EcoRⅠ-3/MseⅠ-1，高達100％，最低的是EcoRⅠ-2/MseⅠ-3，多態(tài)性為89.7％。未發(fā)現(xiàn)任何兩個個體的基因型完全相同

4、的現(xiàn)象。親緣關(guān)系較近的品種間，帶型差異??；反之則大。 聚類分析結(jié)果表明，當(dāng)遺傳距離閥值為39.2～40.1時，全部供試生物型可分為6類：第1類包括：碭山酥梨和其變異類型以及一些地方品種、雜交種；第2類包括：雪花梨、鴨梨、紫酥、慈梨、早美酥、豐水、新高，白梨和砂梨聚在了一類；第3類包括庫爾勒香梨、紅香酥；南果梨、紅巴梨、豆梨各聚一類。 碭山酥梨的8個變異類型，運用AFLP技術(shù)進行分析，與對照碭山酥梨相比，變化的條帶為：銹酥