免疫磁性微球的制備及在乳腺癌診斷中的應用研究.pdf

1、目前癌癥是困擾人類生活的幾大疾病之一，并且正成日趨增生的形勢?，F(xiàn)在平均每年癌癥發(fā)病率在22％左右。所以治療癌癥是件人們刻不容緩的主要任務。目前的醫(yī)療設施所檢測到的癌癥大多都屬于中晚期，發(fā)現(xiàn)的比較晚而此時的癌細胞以基本擴散，藥物難以治療。戰(zhàn)勝癌癥最重要的是早發(fā)現(xiàn)，早期癌癥大都可以治愈。最初癌腫瘤細胞的無序生長使其失去了相互黏附的能力，松散的腫瘤細胞可以進入血管和淋巴管，進入血液循環(huán)或淋巴循環(huán)，通過血液循環(huán)實現(xiàn)轉移的細胞稱之為循環(huán)腫瘤細胞(

2、circulating tumor cells；CTCs)。腫瘤發(fā)生轉移的早期，循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)可以沿循環(huán)系統(tǒng)種植于遠處器官，逐漸形成轉移灶。但是使用現(xiàn)有的、常規(guī)的、經(jīng)驗性的診斷手段卻無法“看到”這樣的轉移過程。因此，研究發(fā)展一種新的可以檢測轉移腫瘤細胞的方法是非常有必要的。很多研究已經(jīng)證明，應用檢測少量血中循環(huán)腫瘤細胞簇(CTCs)的結果進行分析，對推測每個獨立患者具體愈后，評估治療反應的準確性和有效性都可以有明顯改善。顯然，

3、單個細胞水平檢測外周血血中的循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)要比影像學分析更為敏感。最近發(fā)展出來的研究技術主要是通過包被在磁性微球上的特異抗體來結合“捕獲”循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)。乳腺癌細胞存在于人的乳腺相對于其它體內(nèi)癌細胞更容易受到外在的機械作用力從而也更容易脫落形成循環(huán)腫瘤細胞。進而用特異性免疫磁性微球去捕獲早期乳腺癌循環(huán)腫瘤細胞進行早期檢測相對于其它癌癥的早期檢測更方便、準確。本文將圍繞微米級免疫磁性微球的合成以及免疫磁珠的制備進行研究

4、，重點放在考察制備條件，雜細胞的去除率，循環(huán)腫瘤細胞的捕獲率等。首先對磁性微球的粒徑大小，磁響應性，表面羧基含量等方面進行分析篩選出較適合制備免疫磁性微球的磁珠；然后用共價偶聯(lián)法合成免疫磁性微球復合體；再用此復合體去捕獲目的細胞，實現(xiàn)雜細胞的去除及循環(huán)腫瘤細胞的富集。具體的研究方法和結論概括如下：
　　 采用透射電鏡、掃描電鏡、電子顯微鏡測定微球粒徑，觀察表面形態(tài)。通過測電導率表征磁性微球(Magnetic polymer mi

5、crospheres)表面羧基含量。挑選出粒徑大小在10μm左右分布均勻，成球性較好，表面羧基含量在0.1～0.5mmol/g的磁性微球。在一定振蕩條件下，通過共價偶聯(lián)法制備免疫磁性微球復合體，分光光度計測定親和素(Neutravidin)的結合率。實驗表明，親和素-磁性微球的制備過程中反應溫度在4℃，親和素濃度0.2mg/ml,在pH值5.8的PBS反應環(huán)境下反應2h，其親和素載量在25～55mg/g。制備生物素化抗體時BNHS與抗體