建立一種對21-18-13-X-Y染色體數(shù)目異常進行聯(lián)合診斷的多重定量PCR體系.pdf

1、目的：利用定量 PCR技術，設計多對引物，建立一種可以對21、18、13、X、Y五對染色體非整倍體異常進行聯(lián)合診斷的多重定量熒光PCR體系。
　　方法：選取21號染色體上位點 D21S2052、D21S1441、D21S1446、LFG21、D21S1435、D21S11、D21S1246、PentaD，共8對；18號染色體位點 D18S51、D18S535、D18S1002、D18S877、D18S851、D18S391，共6對

2、；13號染色體位點D13S256、D13S797、D13S317、D13S305、D13S800、D13S325，共6對；性別位點共7對，包括X染色體位點DXS9895、DXS6805、XHPRT3對，Y染色體位點SRY1對，XY共有位點AMEL、ZFXY2對，X和3號常染色體共有位點TAF9L1對，共27對位點進行熒光定量 PCR。并對500例正常樣本，160例已知核型分析的陽性樣本和40例臨床診斷為高危的羊水樣本進行研究，并抽取40

3、例正常樣本和全部高危羊水樣本同時進行染色體核型分析的對照試驗來驗證體系的準確度和可靠性。
　　結果：1 QF-PCR結果：檢測報告在24～48小時內(nèi)得出，共檢測700例，分析成功681例（檢出率97.28％）。其中500例正常樣本檢出485例，包括男性258例，女性227例，抽取40正常樣本同時進行QF-PCR和核型分析，兩種檢測結果除2例核型分析結果失敗無法比對外，其余38例檢測結果完全一致（一致率100%），均為21、18、1

4、3、X、Y正常樣本；160例已知核型染色體異常樣本檢出159例，失敗1例，檢出結果與核型結果一致，包括79例21-三體綜合征，73例XXY綜合征，5例18-三體綜合征，1例13三體綜合征，1例XYY綜合征；40例高危樣本檢測成功37例，失敗3例，共檢出21、18、13、X、Y染色體數(shù)目正常27例，異常10例，即10例21三體綜合征，與核型分析結果一致。2核型分析結果：檢測報告約在2～3周得出；共進行核型分析樣本80例，成功73例，成功率

5、91.25%，失敗7例，失敗率8.75%，其中核型正常63例，40例臨床檢測為高危的樣本細胞培養(yǎng)失敗5例，成功的樣本中染色體數(shù)目異常10例，且10例為21三體綜合征。3兩種結果比較：QF-PCR技術更快捷，成功率更高，兩種方法一致性100%，總體異常檢出率100%，總體檢測假陰性率0%，假陽性率為0%。
　　結論：研究表明，本研究中所選擇的染色體位點在中國人群中具有較高的多態(tài)性，QF-PCR體系可以對染色體數(shù)目異常進行簡便、快速、