伊馬替尼對K562細胞粘蛋白型O-糖基化的影響.pdf

1、目的：伊馬替尼處理K562細胞后，分析粘蛋白型腫瘤相關(guān)糖抗原（TACAs）的表達水平差異；同時檢測合成粘蛋白型TACAs的幾種糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達水平變化以及ppGalNAc-Ts與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)共定位程度的變化，并初步探討K562細胞表面異常O-糖基化的原因。初步討論伊馬替尼耐藥的K562細胞粘蛋白型TACAs及合成這些粘蛋白型TACAs的糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達水平變化。
　　方法：（1）伊馬替尼處理K562細胞后，流式細

2、胞術(shù)檢測細胞表面粘蛋白型TACAs表達水平變化；免疫熒光技術(shù)檢測伊馬替尼處理K562細胞后，糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAc-Ts與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的共定位程度的變化。（2）伊馬替尼處理K562細胞后，RT-PCR檢測合成粘蛋白型TACAs的糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達水平變化。（3）通過逐步提高培養(yǎng)基中伊馬替尼的濃度，篩選得到伊馬替尼耐藥的K562細胞株，通過RT-PCR、細胞凋亡實驗和MTT鑒定該耐藥細胞株；流式細胞術(shù)檢測K562耐藥細胞株細胞表面

3、粘蛋白型TACAs的表達水平變化，RT-PCR檢測K562耐藥細胞株中合成粘蛋白型TACAs的幾種糖基轉(zhuǎn)移酶基因mRNA的表達水平差異。
　　結(jié)果:（1）伊馬替尼處理K562細胞后，細胞表面的Tn抗原表達上升，而T抗原和唾液酸化的T抗原表達下降，糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAc-Ts與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的共定位程度降低。（2）伊馬替尼處理K562細胞后，ppGalNAc-T2、ST3NAc1、C1Gal-T1、ST6GalNac1和ST6GalNA

4、c4五種糖基轉(zhuǎn)移酶基因的mRNA表達水平都有不同程度的下降。（3）篩選得到伊馬替尼耐藥的K562細胞株，其MDR1基因表達水平明顯增高，細胞凋亡實驗和MTT實驗鑒定該細胞株確實具有耐藥性，并將其命名為K562A；流式細胞術(shù)檢測K562A細胞表面Tn抗原和唾液酸化的T抗原表達水平比K562細胞高，而T抗原比K562細胞低。RT-PCR檢測K562A細胞株中ppGalNAc-T2、ST3Gal1和ST6GalNAc4三種糖基轉(zhuǎn)移酶基因的mR

5、NA表達水平比K562細胞高，而K562A細胞株中C1Gal-T1和ST6GalNAc1兩種糖基轉(zhuǎn)移酶基因的mRNA表達水平比K562細胞低。
　　結(jié)論：（1）伊馬替尼能影響K562細胞表面Tn抗原、T抗原和唾液酸化的T抗原等粘蛋白型TACAs的表達。（2）BCR-ABL激酶能增強Src激酶的活性，Src激酶促使ppGalNAc-Ts通過COP I有被小泡從高爾基體運送到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，從而使O-糖鏈的合成方式發(fā)生變化，進而影響K562細

6、胞表面粘蛋白型TACAs的表達，據(jù)此推測伊馬替尼通過抑制BCR-ABL激酶活性從而可能影響O-糖鏈的起始合成，進而影響細胞表面的粘蛋白型TACAs表達發(fā)生變化。（3）伊馬替尼還能影響K56細胞中合成TACAs的糖基轉(zhuǎn)移酶基因的表達，推測伊馬替尼影響K562細胞表面粘蛋白型TACAs的表達還可能是通過抑制相關(guān)糖基轉(zhuǎn)移酶基因的表達而引起的。（4）篩選得到的伊馬替尼耐藥細胞株K562A高表達P-糖蛋白，K562A細胞表面Tn抗原和唾液酸化的T