心之絡病“孫絡疏失”的中醫(yī)微觀病理特征研究.pdf

1、目的:應用冠狀動脈微血管缺血動物模型,闡明冠狀動脈微血管缺血的病理變化與心之絡病孫絡疏失病理類型的密切相關性,揭示孫絡疏失發(fā)生、發(fā)展的病理特征。
　　方法:將心電圖正常的240只雄性 SD大鼠隨機分為假手術組、造模30min組、造模1h組、造模6h組、造模12h組、造模24h組,每組40只。通過結扎大鼠冠狀動脈前降支的方法造成急性心肌缺血模型(“孫絡疏失”模型),假手術組只穿線不結扎。造模成功后,各組分別于規(guī)定時間點檢測或取材。每

2、組5只用于心電圖連續(xù)監(jiān)測;每組10只用于心臟TTC染色、活體微循環(huán)觀測技術檢測心肌表面血流量變化;每組5只用于HE染色方法觀察心肌組織病理改變,透射電鏡技術觀察心肌細胞超微結構變化;每組10只用于放射免疫法檢測血漿內皮素-1(ET-1)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1а(6-keto-PGF1а)、血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)、一氧化氮(NO)、血管內皮生長因子(VEGF)水平;每組5只用于免疫組織化學檢測微血管密度(MVD)

3、、血管內皮生長因子(VEGF)、B細胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相關X蛋白(Bax)、TUNEL染色;每組5只用于qPCR法檢測iNOSmRNA、ET-1mRNA、ICAM-1mRNA、VCAM-1mRNA表達。
　　結果:
　　1、心電圖:造模開始 ST段進行性抬高,后逐漸有所回落,部分大鼠回落至基線水平,病理性Q波自30min起一直存在。心電圖動態(tài)監(jiān)測過程中,部分大鼠短暫出現(xiàn)以房室傳導阻滯、室性早搏為主的心

4、率失常。
　　2、心臟TTC染色:造模開始至1h大鼠心臟染色均呈紅色,未見白色;造模6h、12h、24h組大鼠左心室、心尖部及室間隔部分染色呈白色。
　　3、心臟表面血流量:自造模開始大鼠心臟表面血流量明顯下降,至12h有所回升但仍低于假手術組,24h時血流量已回升至假手術組同一水平。
　　4、心肌組織形態(tài)學觀察:光鏡下觀察:30min及1h以炎性細胞浸潤和部分心肌細胞壞死為主要改變,6h炎性細胞浸潤最明顯并伴有心肌細

5、胞壞死溶解改變,12h和24h以心肌組織內增生改變?yōu)橹?且24h炎性細胞浸潤不明顯;電鏡下觀察:開始僅見Z線和M線可見迂曲模糊,閏盤局灶性模糊,線粒體輕度腫脹等輕度病理變化,隨后出現(xiàn)心肌細胞水腫,肌原纖維灶性溶解等變化,進一步加重出現(xiàn)心肌細胞壞死及血管間質內皮細胞凋亡,病變隨時間推移呈逐漸加重趨勢,12h最為嚴重。
　　5、血漿舒縮因子含量:血漿6-keto-PGF1а水平顯著下降(P<0.01或P<0.05),于12h達到最低水

6、平;血漿TXB2水平顯著升高(P<0.01),而后明顯下降(P<0.05);血漿ANGⅡ在造模30min組、造模1h組顯著降低(P<0.01或P<0.05),而后回升至正常水平;血漿ET-1水平在造模1h組、造模6h組、造模12h組顯著升高(P<0.05),并于24h恢復正常;血漿NO水平于造模12h顯著升高(P<0.01);各個模型組血漿VEGF水平較假手術組均無明顯升高或降低。
　　6、新生與凋亡蛋白表達:VEGF與CD34的

7、各模型組較假手術組均顯著升高(P<0.01);TUNEL法檢測凋亡陽性細胞個數(shù)于各造模組顯著升高(P<0.01), Bcl-2及Bax值于各造模組均顯著升高(P<0.01)。
　　7、舒縮因子mRNA表達:iNOSmRNA值顯著升高(P<0.01或P<0.05),造模30min組則無明顯差別; ET-1mRNA值于造模12h組、造模24h組顯著升高(P<0.01);ICAM-1mRNA值明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)

8、,其余各組較假手術組無顯著變化;ICAM-1mRNA值明顯升高(P<0.01)且非梗死區(qū)升高早于梗死區(qū); VCAM-1mRNA值顯著升高(P<0.01),且非梗死區(qū)升高明顯早于梗死區(qū)。
　　結論:
　　1、應用冠狀動脈前降支結扎方法制作大鼠“孫絡疏失”模型證實可靠。
　　2、“孫絡疏失”模型造成心臟表面孫絡功能缺少和(或)數(shù)量減少,機體可通過代償調節(jié)恢復部分功能。
　　3、“孫絡疏失”造成心肌細胞炎性浸潤、心肌纖