Bcl-2對兔角膜內皮細胞凋亡的調控及LN對其表達的影響.pdf

1、　　目的：(1) 通過觀察抗兔Bcl-2抗體對兔角膜內皮細胞凋亡情況的影響,探討B(tài)cl-2對角膜內皮細胞凋亡的調控關聯性：(2) 研究層粘連蛋白對兔角膜內皮細胞bcl-2表達的影響。
　　方法：(1) 倒置顯微鏡觀察體外培養(yǎng)的兔角膜內皮細胞形態(tài)及數目變化,計數每天的細胞數目并繪制細胞生長曲線；分別在基礎培養(yǎng)液和添加抗兔Bcl-2抗體的培養(yǎng)液中培養(yǎng)兔角膜內皮細胞24h,紫外線誘導角膜內皮細胞凋亡,再培養(yǎng)24h,流式細胞技術和電鏡技術

2、檢測并比較兩組細胞凋亡情況。(2) 利用ELISA方法探索層粘連蛋白對兔角膜內皮細胞的最適濃度；然后分別在基礎培養(yǎng)液和添加層粘連蛋白的培養(yǎng)液中培養(yǎng)內皮細胞12h,利用免疫組化技術和ELISA檢測分析兔角膜內皮細胞bcl-2表達情況。
　　結果：(1) 細胞生長曲線圖提示細胞生長符合一般細胞生長規(guī)律；流式細胞技術檢測顯示抗體處理組凋亡細胞比例顯著高于對照組,提示Bcl-2可以抑制角膜內皮細胞的凋亡,增強其活性。光鏡下,對照組細胞分布

3、呈花瓣樣、團狀分布,細胞密度適中,細胞緊密貼附培養(yǎng)皿底部,細胞邊界清晰,細胞核大小一致,清晰可見；與對照組相比,抗體處理組細胞生長不良,部分細胞不能與培養(yǎng)皿底部緊密貼附,漂浮于培養(yǎng)液表面,細胞胞漿內空泡多見,胞核形狀大小不一致,邊界稍模糊；透射電鏡發(fā)現抗體處理組有明顯的凋亡表現,如染色質邊集,核濃縮,出現凋亡小體等。(2) 利用ELISA方法初步顯示層粘連蛋白可以促進兔角膜內皮細胞bcl-2表達并有劑量依賴關系,最終測得層粘連蛋白對兔角