HARV和微載體技術在胎兒BMSCs向軟骨細胞轉化中的應用.pdf

1、目的：利用體外培養(yǎng)的技術原理，在高截面縱橫比容器(highaspectratiovessel，HARV)中應用微載體技術和無血清完全培養(yǎng)基進行胎兒骨髓間充質干細胞(bonemesenchymalstemcells，BMSCs)向軟骨細胞的誘導分化，以有效獲得表型正常的軟骨組織工程用功能細胞。方法：取引產(chǎn)胎兒骨髓懸液，經(jīng)Percoll密度梯度離心，獲取單個核細胞；以含10％胎牛血清低糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，經(jīng)12～14天后獲得成纖維樣單層貼

2、壁的胎兒BMSCs；胰酶消化、傳代，取第3代的細胞經(jīng)流式細胞儀鑒定純度后，以其為種子細胞，1×107個細胞與Cytodex-3微載體充分混勻后，放入HARV中，在無血清完全培養(yǎng)基作用下誘導培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)的7、14天取材，RT-PCR技術檢測細胞內(nèi)Ⅱ型前膠原mRNA的表達水平；同時以培養(yǎng)瓶誘導培養(yǎng)作對照。結果：經(jīng)Percoll密度梯度離心所獲得的單個核細胞貼壁、擴增、傳代后，流式細胞儀鑒定胎兒BMSCs的純度達95％以上；培養(yǎng)瓶誘導培養(yǎng)