PTX3過表達與沉默對巨噬細胞脂質攝取與流出的影響及相關機制.pdf

1、背景：目前認為動脈粥樣硬化(AS)是由巨噬細胞和淋巴細胞對“入侵”動脈壁的致病性脂蛋白所產生的炎癥反應,在動脈粥樣硬化各個階段都可以見到炎癥反應的存在。脂質代謝的異常和血管壁的慢性炎癥是AS發(fā)生和發(fā)展過程中的重要特征。很多炎癥因子可以同時參與炎癥反應和脂質代謝的調節(jié)。正五聚蛋白3(PTX3)是近年來新發(fā)現的一個炎癥因子,屬于長鏈正五聚蛋白,與動脈粥樣硬化和冠狀動脈疾病密切相關。研究發(fā)現修飾后的脂蛋白可以誘導人血管平滑肌源性泡沫細胞表達P

2、TX3,并且很多研究證明了在人動脈粥樣硬化斑塊進展期,動脈粥樣硬化斑塊脂核中的巨噬細胞/泡沫細胞表達大量的PTX3。盡管目前有很多研究發(fā)現PTX3在富于脂質的巨噬細胞中呈高表達,但其是否對巨噬細胞的脂質攝取和流出產生影響及相關機制仍不清楚。
　　目的：通過研究PTX3對人和小鼠巨噬細胞攝取氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)與膽固醇流出的影響及其潛在機制,探討其在動脈粥樣硬化中的作用。
　　方法：體外培養(yǎng)人巨噬細胞系THP-1細

3、胞和小鼠巨噬細胞系RAW264.7細胞,瞬時轉染pSG5hPTX3或PTX3siRNA質粒,與ox-LDL和/或[3H]-膽固醇等共同培養(yǎng)。各組經相應處理后,采用酶法,通過熒光分光光度計檢測細胞的總膽固醇(TC)和游離膽固醇(FC)含量,并計算膽固醇酯(CE)含量;用液體閃爍計數法檢測細胞的[3H]-膽固醇含量,并計算膽固醇流出率。用Real time-PCR和Western blot的方法檢測各組細胞中PTX3、PPARγ、LXRα和

4、ABCA1等基因和蛋白表達水平的變化。
　　結果：
　　1.熒光酶法實驗結果表明,50μg/ml ox-LDL刺激THP-1細胞空載體轉染組24h后其TC,FC,CE和CE/TC(％)含量分別為298±15nmol/mg,205±9nmol/mg,94±21nmol/mg,31±5.7％,與未加ox-LDL刺激的空質粒組對比具有顯著性意義(P<0.05);PSG5hPTX3轉染+ox-LDL刺激組與空載體轉染+ox-LDL刺

5、激組比較,可見膽固醇含量顯著增高(P<0.05),分別為380±15nmol/mg,223±10nmol/mg,157±21nmol/mg,41±4.1％;而ERK1/2通路抑制劑PD98059加入后可顯著抑制ox-LDL的攝取(P<0.05),其膽固醇含量分別為282±19nmol/mg,217±20nmol/mg,71±3nmol/mg,25±1.7％;另外,50μg/ml ox-LDL刺激RAW264.7細胞空載體轉染組24h后其

6、TC,FC,CE和CE/TC(％)含量較未加ox-LDL刺激的空質粒對照組顯著增高(P<0.05),分別為419±23nmol/mg,238±16nmol/mg,182±17nmol/mg,43±3％;PSG5hPTX3轉染+ox-LDL刺激組與pSG5空載體轉染+ox-LDL刺激組比較,可見膽固醇含量顯著增高(P<0.05),分別為551±15nmol/mg,261±23nmol/mg,291±27nmol/mg,53±4.2％;而p

7、38/MAPK-2通路抑制劑SB203580加入后可顯著抑制ox-LDL的攝取(P<0.05),其膽固醇含量分別為275±17nmol/mg,188±13nmol/mg,88±15nmol/mg,32±4.1％。
　　2.膽固醇流出的結果顯示,與pSG5空載體轉染組相比,PSG5hPTX3質粒轉染THP-1和RAW264.7巨噬細胞組的膽固醇流出率分別下調了33％和29％;而PTX3siRNA質粒轉染RAW264.7細胞組,其PT

8、X3被沉默,載脂蛋白A-I介導的膽固醇流出明顯上調,與GFP空載體轉染組相比,分別上調了27％和21％。另外,實驗還發(fā)現,與PSG5hPTX3質粒轉染組相比,ERK1/2通路抑制劑PD98056可阻斷PTX3過表達的THP-1巨噬細胞組的膽固醇流出率約27％,而p38/MAPK-2通路抑制劑SB203580加入后可阻斷hPTX3過表達的RAW264.7細胞組的膽固醇流出率達34％。
　　3.PTX3在THP-1和RAW264.7巨

9、噬細胞系過表達后可顯著下調PPARγ、LXRα和ABCA1mRNA和蛋白的表達(P<0.05),而PTX3沉默后,PPARγ、LXRα和ABCA1的表達上調(P<0.05)。
　　結論：PTX3可以促進THP巨噬細胞和RAW264.7細胞對ox-LDL的攝取并抑制apoA-I介導的膽固醇流出,ERK1/2通路或p38/MAPK通路可能分別參與了該過程。PTX3也可通過下調PPARγ、LXRα和ABCA1這些膽固醇流出相關分子的表達