甘薯病毒G(SPVG)外殼蛋白基因的克隆、序列分析及在大腸桿菌中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、甘薯是我國四大主要糧食作物之一,也是重要的飼料和輕工業(yè)原料,在我國分布廣泛。未來對糧食日益增長的需求和甘薯自身的產量高、適應性廣等特點將使甘薯置身于優(yōu)越的競爭地位。但由于甘薯病毒病的廣泛存在,嚴重影響了甘薯的產量和品質。對甘薯病毒病的防治,目前尚無特別有效的化學方法,利用莖尖分生組織培養(yǎng)技術培育甘薯脫毒品種是防治甘薯病毒病最有效的方法,而明確侵染甘薯的主要病毒種類,制備特異性抗體,建立高效快速的病毒檢測技術是培育脫毒甘薯的關鍵。甘薯病毒

2、G(SweetPotatoVirusG,SPVG)是侵染甘薯的主要病毒之一,其常常與甘薯羽狀斑駁病毒(SPFMV)等其他potyvirus屬病毒混合侵染,導致甘薯產量降低、品質變劣和種性退化,對甘薯生產造成嚴重危害。目前對SPVG的分子生物學還缺乏深入的研究,國內也未見對SPVG的研究報道。本項研究將通過對SPVG外殼蛋白(CP)基因的克隆、序列分析,明確SPVG河南分離物與其他分離物之間的差異;并通過在大腸桿菌中表達CP基因,通過純化

3、蛋白、免疫家兔制備抗體,建立該病毒的快速檢測技術,為進一步的研究奠定基礎。 根據已報道的SPVGCP基因的核苷酸序列設計引物,以感染SPVG的巴西牽牛(Ipomoeasetosa)葉片總RNA為模板,經RT-PCR擴增獲得SPVG河南分離物(SPVG-HN)CP基因的目的片段。將其克隆到pMD18-Tvector上,進行序列測定。序列分析結果表明:SPVG-HNCP基因由1065個核苷酸組成(GenBank登錄號為DQ39986

4、1),編碼355個氨基酸殘基。與GenBank中Egypt1(AJ515380)、LSU-1(AY178991)和LSU-3(AY178990)分離物的核苷酸序列相似性為98%左右,與中國廣東分離物SPVG-CH(X76944)和SPVG-CH2(Z83314)的相似性分別為98.1%和85.5%。說明SPVG-HN與SPVG-CH關系較近,而與SPVG-CH2關系較遠。利用基因工程方法,將SPVG-HNCP基因克隆到原核表達載體pET

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