慢性乙型肝炎病毒感染病毒復制與肝細胞內質網應激反應相關性的初步探討.pdf

1、目的:既往研究結果提示乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)可以誘導肝細胞內質網應激（endoplasmic reticulum stress，ER stress）反應并與病毒復制、肝細胞損傷、肝癌發(fā)生等相關，但對HBV誘導肝細胞ER stress的機制尚不明確，肝細胞ER stress反應是否與HBV復制水平有關尚無研究。本研究通過體內、體外研究探討HBV復制水平與肝細胞ER stress相關基因的表達的相關性。<

2、br>　　 方法:1、體內研究對象為7例慢性HBV感染者，取肝臟穿刺活檢肝組織液氮冷凍保存，統一提取mRNA，同時檢測肝功能并用定量PCR方法測定外周血HBVDNA;2、體外研究以HBV基因轉染人肝癌細胞株（HepG2.2.15）及人肝癌細胞株（HepG2）細胞為研究對象，分三組:對照組（HepG2細胞）、HepG2.2.15細胞組、拉米夫定（lamivudine，3TC）干預組（50μg/ml3TC作用于HepG2.2.15細胞），

3、分別于培養(yǎng)2天、4天、6天收集上清應用實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time quantitativepolymerase chain reaction，PCR)定量測定HBV-DNA載量，并同時收集細胞提取mRNA;3、以β-actin為內參照，應用SYBR Green熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(SYBRGreen quantitative reverse transcriptase-polymerase chain react

4、ion，RT-PCR)技術檢測葡萄糖調節(jié)蛋白78(glucose regulated protein78，GRP78)、X盒結合蛋白1(X box-bindingprotein1，XBP1)、活化轉錄因子6（activating transcription factor6，ATF6）、活化轉錄因子4（activating transcription factor4，ATF4）及轉錄因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的mRNA表達，以比較

5、不同HBV載量時ER stress相關基因表達;4、以HepG2.2.15細胞組、3TC干預組為研究對象，用蛋白免疫印跡方法(western blotting，WB)檢測GRP78的表達以判斷ER stress。
　　 結果:1、慢性HBV感染者肝組織GRP78 mRNA、ATF6 mRNA表達水平與外周血HBVDNA水平顯著正相關，差異具有統計學意義(P＜0.05); GRP78、CHOP、XBP1及ATF6 mRNA表達水平

6、與肝組織纖維化程度及炎癥程度無顯著相關性;HBVDNA≥107copies/ml與HBVDNA＜107copies/ml慢性HBV感染組比較GRP78、CHOP、XBP1及ATF6 mRNA表達水平相差也無顯著性意義;2、體外細胞RT-PCR結果表明拉米夫定處理后HepG2.2.15細胞HBVDNA水平從2天至6天有所下降，但各組GRP78、CHOP、XBP1及ATF6 mRNA表達水平差異無統計學意義;3、體外細胞WB結果發(fā)現GRP7