15852.laminin和fibronectin對胰腺祖細胞增殖及分化的調控研究

1、學校代碼：10225學號：S13164學位論文Laminin和Fibronectin對胰腺祖細胞增殖及分化指導教師姓名：申請學位級別：論文提交日期：授予學位單位：的調控研究馮銳成滕春波教授碩士20134東北林業(yè)大學東北林業(yè)大學學科專業(yè)：發(fā)育生物學論文答辯日期：授予學位日期：答辯委員會主席：論文評閱人：未必櫛素大學摘要摘要糖尿病是一類常見的代謝疾病，主要包括I型糖尿病和II型糖尿病。I型糖尿病是由于胰腺B細胞自身免疫損傷造成胰島素分泌不足

2、，患者需要注射外源胰島素維持血糖在正常水平。胰島移植是治療I型糖尿病的一種有效方法，但是由于供體不足，限制了該方法的推廣使用。因此，我們把目光投向利用胰腺干細胞治療糖尿病。發(fā)育中的胰腺需要一個微環(huán)境來調控祖細胞的自我更新和命運，而這種微環(huán)境包括相鄰的細胞、溶解的因子和細胞外基質；其中細胞外基質不僅提提供了力學上的支持，同時對于細胞的粘附、遷移、延展、增殖、分化和功能都有調控作用。細胞外基質是一種典型的大分子糖蛋白混合物，主要包括纖連蛋白

3、(Fibronectin)、層粘連蛋白(Laminin)、膠原和蛋白聚糖類。細胞外基質作為配體只有和細胞膜表面的受體結合后，才能將細胞外的信號傳到細胞內。整合素是細胞外基質的一類重要受體，是跨膜的異源二聚體，由0L、B兩種亞基組成，在結構上可以分為胞外區(qū)、胞內區(qū)和跨膜區(qū)。整合素和細胞外基質在脊椎動物相對保守，到目前為止，18種0【和8種D亞基被發(fā)現(xiàn)，并形成24種不同的整合素受體。細胞外基質與相應整合素受體胞外區(qū)結合后，激活胞內區(qū)和下游的

4、信號原件，并激活相應的信號通路。通常認為細胞外基質和整合素受體主要通過P13KAktan／或ERK信號通路來調控細胞的增殖、分化等行為。Laminin和Fibronectin是胰腺中細胞外基質的主要組成部分，在胚胎胰腺發(fā)育的早期決定細胞形態(tài)發(fā)生、遷移、分化和增殖。在本實驗中我們分別用Laminin和Fibronectin包被培養(yǎng)胰腺祖細胞，CCK8和Ki67免疫熒光染色檢測發(fā)現(xiàn)，在增殖培養(yǎng)條件和非增殖培養(yǎng)條件下，Laminin和Fibr

5、onectin都能促進胰腺祖細胞增殖。Westernblot檢測經Laminin或Fibronectin包被處理后培養(yǎng)的細胞，Akt、ERK磷酸化水平較對照組BSA升高；分別使用P13KAkt抑制劑LY294002，ERK抑制劑PD98059或U0126處理Laminin或Fibronectin包被的細胞，則LY294002能顯著抑制Laminin或Fibronectin對胰腺祖細胞的促增殖作用，而PD98059的抑增殖作用不明顯，U0

6、126則完全沒有抑制作用，說明Laminin和Fibronectin對胰腺祖細胞的促增殖作用主要通過P13KAkt信號通路。為了探明Laminin和Fibronectin在胰腺祖細胞表面的整合素受體，實時定量RTPCR檢測了Laminin或Fibronectin包被后整合素不同亞基的表達變化。結果表明，在胰腺祖細胞中整合素Dl的表達量最高；當用p1抗體阻斷時，Laminin包被對胰腺祖細胞的促增殖作用完全被抑制，F(xiàn)ibronectin包

7、被對胰腺祖細胞的促增殖作用也大大降低，說明整合素Dl在細胞外基質Laminin或Fibronectin調控胰腺祖細胞的增殖過程中為細胞表面受體的主要組成部分。為了探索Laminin或Fibronectin包被對胰腺祖細胞增殖的基因表達變化調節(jié)，我們通過RTPCR和實時定量RTPCR檢測了細胞周期相關基因，祖細胞標志分子，內分泌分化分子，外分泌分化分子的表達情況。結果表明，Laminin或Fibronectin包被可以促進細胞周期蛋白cy