IGF1在綿羊成肌細胞增殖與分化中的作用.pdf

1、胰島素樣生長因子1(Insulin-like growth factor-1,IGF1)因其結構與胰島素類似而得名。IGF1能有效促進骨骼肌生長同時增強再生肌肉的收縮力,而且能夠激活RNA聚合酶等活性,促進非組蛋白的磷酸化,提高mRNA水平,從而刺激RNA和DNA的合成,促進細胞生長,推動細胞依次經(jīng)歷細胞周期的各個時期。IGF1如何影響綿羊成肌細胞的機制目前仍不十分清楚,本研究通過分析 IGF1在綿羊成肌細胞增殖和分化中的作用探討IGF

2、1促進肌肉生長的分子機制。
　　本研究克隆了綿羊IGF1基因,將其與慢病毒表達載體(pLEX-mcs)連接,構建了IGF1真核表達載體,建立了IGFI穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的綿羊成肌細胞系,采用細胞生長曲線測定、流式細胞術以及免疫熒光進一步分析了在過表達情況下 IGF1對綿羊成肌細胞增殖分化的影響。同時,通過RT-PCR、Realtime PCR檢測了過表達IGF1綿羊成肌細胞中與增殖和分化相關基因的表達變化,從細胞水平探討了IGF1對綿羊成肌

3、細胞增殖分化的作用機制。本研究獲得主要數(shù)據(jù)和結果如下:
　　1、克隆了518bp綿羊 IGF1全長編碼區(qū)序列并在綿羊成肌細胞中過表達 IGF1, Western blotting檢測顯示,IGF1在綿羊原代成肌細胞中獲得表達。
　　2、利用差速貼壁法從胎羊肌肉組織中分離培養(yǎng)了成肌細胞,經(jīng)細胞純化和鑒定,獲得了>90％高純度的綿羊成肌細胞系。
　　3、細胞生長曲線顯示穩(wěn)定表達IGF1的成肌細胞比對照細胞生長速度顯著加快(

4、第1天差異顯著(P<0.05),第2-6天差異極顯著(P<0.01))。IGF1瞬時轉(zhuǎn)染成肌細胞繪制的生長曲線結果與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染相吻合;細胞周期測定顯示穩(wěn)定表達 IGF1的成肌細胞比對照細胞較早進入S期,且在S期細胞數(shù)目比對照細胞增加7.77%,并且上調(diào)了IGF1R、Akt1基因的表達。該結果與生長曲線結果相符。上述結果說明,IGF1有促進綿羊成肌細胞增殖的作用。
　　4、MyHC免疫熒光測定細胞融合率及肌管直徑結果顯示,IGF1過表

5、達細胞系肌管融合率和肌管直徑分別為30.96%和55.29μm,相比對照細胞系的12.26%和25.86μm有顯著增加,其融合率提高了60.4%,直徑高出近一倍,并且上調(diào)了分化調(diào)控關鍵基因MyoD、Myogenin的表達。在加入MSTN的情況下,IGF1轉(zhuǎn)化細胞的肌管融合率和直徑分別為10.43%和31.92μm,而對照組細胞肌管融合率和直徑分別為6.09%和23.27μm,差異均顯著(P<0.05)。該結果說明在MSTN存在的情況下,