BADH基因在轉基因番茄中的組成型和鹽誘導表達.pdf

1、在植物抗逆基因工程中，許多基因包括轉錄因子都由組成型啟動子或脅迫誘導啟動子驅動。組成型啟動子驅動外源基因在轉基因植株中組成表達，會引起轉基因植株生長抑制和產(chǎn)量降低。誘導啟動子驅動外源基因在轉基因植株中誘導表達，不影響植株生長和產(chǎn)量。
　　 甜菜堿醛脫氫酶(BADH)是植物體內合成甜菜堿這一過程中的關鍵酶。甜菜堿是一種非毒性的小分子滲透調節(jié)物質，在植物耐鹽中起著非常重要的作用。BADH基因受鹽誘導表達，它的啟動子(P5：-300～

2、+62bp)是鹽誘導啟動子。
　　 本研究將分別由P5啟動子和CaMV35S啟動子驅動的遼寧堿蓬BADH基因，通過葉盤轉化法轉入Micro-Tom中。通過實時定量PCR轉基因Micro-Tom中外源BADH基因的拷貝數(shù)，選擇單拷貝的轉基因植株，并對其BADH基因的表達進行分析，比較兩種轉基因植株的耐鹽性及其生長狀態(tài)，主要結果如下：
　　 1.采用農桿菌介導的葉盤轉化法將P5：BADH和CaMV35S：BADH轉入Micr

3、o-Tom。共采用約400粒種子，獲得約90株再生植株。
　　 2.挑選16株PCR檢測為陽性的轉基因植株，用real time PCR鑒定出3株單拷貝P5：BADH轉基因植株和1株單拷貝CaMV35S：BADH轉基因植株。
　　 3.0 mM，100 mM和200 mM NaCl處理轉基因及野生Micro-Tom24 h后，RealtimePCR檢測表明，P5啟動子誘導BADH基因的mRNA升高2.3倍在100mM N

4、aCl處理下，在200 mM NaCI條件下增加3倍。轉P5：BADH Micro-Tom的BADH表達量明顯高于轉CaMV35S：BADH Micro-Tom。
　　 4.200 mM NaCl處理7天后，野生型植株萎蔫死亡，而轉基因植株仍然存活生長。轉CaMV35S：BADH、P5：BADH基因提高了Micro-Tom的耐鹽性。
　　 5.野生型和兩種轉基因型植株在生長培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和土壤中進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)CaMV