茶樹上冰核活性細菌的分離、鑒定及防治.pdf

1、冰核活性細菌（ice nucleation active bacteria，簡稱INA細菌）是自然界廣泛存在的一類微生物，在沒有冰核活性細菌存在的條件下，植物可以耐受6~7℃的低溫而不發(fā)生凍害，而當冰核活性細菌存在于植物上時，可在2~3℃下被誘發(fā)植物細胞水結冰而發(fā)生霜凍，。這證明了冰核細菌是誘發(fā)和加重植物霜凍的重要因素。
　　 茶樹原產于我國西南較為溫暖濕潤的地帶，抵御低溫的能力不強。在INA細菌存在的情況下，其對低溫的抵御能力

2、更加弱。從微生物的角度研究茶樹抗寒性為茶樹抗凍提供了一種重要的途徑。本實驗通過對一株從茶樹上分離的冰核活性細菌進行鑒定、藥劑防除以及拮抗菌防治，從茶樹微生物的角度為茶樹抗凍提供理論依據(jù)。
　　 本實驗于2009年11月氣溫降低時從大楊店安徽農業(yè)大學實驗基地茶園取樣，取樣范圍覆蓋整個茶園，不以茶樹種類為取樣標準。實驗從樣品中分離到一株INA細菌，該菌株在5℃下在2min內凍滴率達到85％，一個冰核產生需要的細胞數(shù)約為5.4×10

3、3個，該菌株具有較強的冰核活性。經總DNA提取，PCR擴增16SrDNA序列對比分析，該菌株與蔫短小桿菌（Curtobacteriumflaccumfaciens）具有極高的同源性，達到99％。
　　 根據(jù)GenBank上inaQ基因序列（登陸號：EU360731）保守序列設計引物，PCR擴增出冰核基因的片段，經GenBankBLAST比對證明與來自丁香假單胞菌丁香亞種（P．Syringae subsp.syringae)的in

4、p基因具有較高同源性。在5℃條件下，抑菌圈實驗結果為：次氯酸鈣＞亞甲藍＞Tween 80＞藏紅；破壞INA細菌冰核活性物質效果為次氯酸鈣最佳，其他幾種試劑效果不明顯；藥劑觸殺INA細菌結果為：次氯酸鈣＞藏紅＞亞甲藍＞Tween80。結果與文獻報道的含氯化合物抗INA細菌具有的效果一致。本實驗在同一生態(tài)條件下的土壤中分離出一株拮抗菌，經PCR擴增16SrDNA反應與序列分析鑒定該菌株為黃孢原毛平革菌(Phanerochaetechryso