枯草芽胞桿菌TR21的發(fā)酵和海洋細菌DM09的抗真菌活性物質研究.pdf

1、本論文共包括兩部分工作:一部分是對抗香蕉枯萎病4號小種的枯草芽胞桿菌TR21進行了發(fā)酵條件優(yōu)化及田間防效的測定；另一部分是對分離自深海的廣譜抗真菌芽胞桿菌進行了快速分子鑒定,并對其產生的抗真菌物質進行了分離鑒定。
　　 1.香蕉枯萎病是引起維管束壞死的一種毀滅性真菌病害和典型的土傳病害,嚴重影響我國香蕉生產。分離自石斛蘭葉片的枯草芽胞桿菌TR21對香蕉枯萎病病原菌Fusarium oxysporum f.sp.Cubense有很

2、好的拮抗效果。研究發(fā)現(xiàn)該菌的防效和芽胞數成正相關,提高芽胞數可以提高經濟效益并降低成本。本研究對TR21的產芽胞培養(yǎng)基進行了優(yōu)化,并對TR21的田間防效進行了測定。結果如下:
　　 首先確定篩選培養(yǎng)基:玉米粉10 g/L,豆粕粉9 g/L。然后對適合TR21產芽胞的碳源、氮源和無機鹽進行了篩選,得到了基礎配方:玉米粉10 g/L,豆粕粉9 g/L,KH2PO43 g/L。初始pH7.5。然后運用田口穩(wěn)健設計方法對基礎培養(yǎng)基各營養(yǎng)

3、物的濃度及碳氮源搭配進行了優(yōu)化,主要選擇五個因素:初始pH,碳源總量,氮源總量,玉米粉濃度,豆粕粉濃度,KH2PO4。經過信噪比優(yōu)化得出了優(yōu)化條件:初始pH7.0.玉米粉8 g/L,葡萄糖12 g/L,豆粕粉16 g/L,氯化銨4 g/L,磷酸二氫鉀2 g/L,芽胞產量達到19.6×108cfu/mL,比未優(yōu)化的過程(7.0×108)提高了2.8倍。在珠海對TR21的田間防效進行了測定:處理組發(fā)病率明顯低于對照組發(fā)病率,TR21的田間防

4、效可以達到66.95％。
　　 2.核盤菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)]是一種世界性分布的重要植物病原真菌,在我國嚴重威脅油菜生產。生物防治控制核盤菌是目前菌核病防治研究的重點方向。我們分離到一株對核盤菌有顯著拮抗作用的來自深海的芽胞桿菌DM09,對其進行了分類研究,對其拮抗活性物質進行了分離純化,結果如下:
　　 首先通過16S rDNA序列分析,分析其屬于芽胞桿菌屬,

5、但不能準確鑒定到種；利用gyrB基因blast結果構建系統(tǒng)發(fā)育樹,最終將該菌株確定為B.velezensis。結果顯示利用16S rDNA和gyrB基因組合可以快速準確的鑒定枯草芽胞桿菌組內的近緣種。然后以核盤菌為指示菌,首先通過酸沉淀實驗、兩步超濾實驗推斷出活性物質是脂肽類物質。隨后用酸沉淀、兩步超濾、固相萃取、液相色譜的方法純化了脂肽類物質。經過ESI-MS串聯(lián)質譜鑒定,活性物質分子量為1043.7Da和1057.7Da,兩種活性物