喜樹(shù)毛狀根培養(yǎng)體系的建立及喜樹(shù)hmgs基因的克隆分析.pdf

1、中國(guó)特有樹(shù)種喜樹(shù)(Camptotheca acuminata)是喜樹(shù)屬(Camptotheca Decne)植物。喜樹(shù)堿(camptothecin)是Wall等1966年在喜樹(shù)木質(zhì)部中分離到的一種具有顯著抗腫瘤活性的生物堿。喜樹(shù)堿及其衍生物、紫杉醇以及維生素甲類化合物抗腫瘤作用的發(fā)現(xiàn)被譽(yù)為“20世紀(jì)90年代抗癌藥物的三大發(fā)現(xiàn)”。喜樹(shù)堿是通過(guò)抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ發(fā)揮細(xì)胞毒性的天然植物活性成分。本文以喜樹(shù)為研究對(duì)象，從基因克隆，表達(dá)分析，誘導(dǎo)調(diào)

2、控及喜樹(shù)堿含量比較等方面開(kāi)展了一系列的工作，并取得了以下結(jié)果： 1.首次從喜樹(shù)中克隆了3-羥基—3-甲基戊二酰輔酶A合成酶基因CaHMGS，該基因全長(zhǎng)為1801bp，含有一個(gè)1416bp的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)具有472個(gè)氨基酸的蛋白；序列比較和進(jìn)化分析，發(fā)現(xiàn)CaHMGS與其他植物HMGS具有較高的同源性；組織特異性表達(dá)分析結(jié)果表明CaHMGS并不是一個(gè)組成型表達(dá)基因，在胚軸和子葉中表達(dá)量相似，而在根中檢測(cè)不到表達(dá)；一個(gè)月喜樹(shù)幼苗

3、誘導(dǎo)處理結(jié)果表明CaHMGS是一個(gè)至少在轉(zhuǎn)錄水平上受到調(diào)控的基因，MJ和SA均能在胚軸中非常有效地誘導(dǎo)CaHMGS表達(dá)上調(diào)。 2.首次系統(tǒng)地研究了不同外植體類型(包括真葉，莖段，子葉及胚軸)，胚軸年齡和不同發(fā)根農(nóng)桿菌菌株(包括A4，15834，R1601及C58C1)等因素對(duì)喜樹(shù)毛狀根誘導(dǎo)頻率的影響，并用PCR對(duì)誘導(dǎo)出的毛狀根進(jìn)行了分子鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：5-10天是胚軸最佳誘導(dǎo)年齡段，最佳菌株為15843。 3.成功地