雞大腸桿菌16S rRNA甲基化酶的質粒定位及rmtB基因的遺傳背景.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究采用PCR方法調查了16S rRNA甲基化酶基因(armA,rmtA,rmtB,rmtC,rmtD和npmA)在2008年河南省鄭州周邊收集分離的120株雞大腸桿菌中的分布。并同時檢測了16S rRNA甲基化酶陽性菌株攜帶ESBLs基因(TEM,SHV,CTX-M)的情況。
   在此基礎上,為了進一步了解16S rRNA甲基化酶的傳播方式及機制,首先對16S rRNA甲基化酶陽性菌株進行質粒抽提,對原始菌株的質粒采用So

2、uthern雜交證實16S rRNA甲基化酶基因rmtB是否位于質粒上。接著,以DH10B為受體菌,進行了質粒的電穿孔轉化試驗。
   提取轉化陽性菌株質粒,分別對原始菌株和轉化菌株的質粒進行MegaBase瓊脂糖凝膠電泳分析,比較其耐藥質粒圖譜差異;并采用Southern雜交證實16S rRNA甲基化酶基因rmtB是否轉化成功;通過對rmtB基因陽性菌株質粒進行酶切,用Southern雜交證實rmtB基因位于相同或者不同的質粒

3、上,接著將酶切片段與pBC SK+載體連接并轉化、插入片段確認成功后,送基因測序公司進行測序,并進行序列比對,以進一步了解rmtB的分子遺傳背景。
   結果表明,在分離的120株大腸桿菌中,僅檢測到16SrRNA甲基化酶基因armA和rmtB基因,其檢出率分別為2.5%(3/120)和7.5%(9/120)。12株16S rRNA甲基化酶陽性菌株均攜帶TEM-1。其中分別有l(wèi)株還攜帶有blaCTX-M-14及blaCTX-M-

4、65。
   轉化試驗和質粒圖譜比較分析結果表明,攜帶rmtB基因的陽性質粒可傳遞給受體菌E.coliDH10B。Southern雜交證實rmtB基因位于質粒上。成功地獲得了2株分別為4.6k和7.0k的rmtB基因的分子遺傳圖譜。測序結果表明,4.6k的圖譜中,rmtB基因的下游存在著ISCR1插入序列;而7.0k的圖譜中,rmtB基因的下游存在著IS26插入序列和Tn1721轉座酶基因。
   綜上所述,16S rR

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