西維因對羅非魚內分泌干擾效應非受體介導作用的影響及其遺傳毒性研究.pdf

1、作為普遍使用的氨基甲酸酯類殺蟲劑-西維因，由于地表徑流和不規(guī)范使用，致使其廣泛的殘留與分布，威脅到生物體的生長發(fā)育與生態(tài)環(huán)境的平衡，造成的不良影響已不可忽視。西維因具有一定遺傳毒性和雌激素效應。內分泌干擾效應的作用機制分為受體介導和非受體介導。受體介導作用是指外源性雌激素通過模仿或拮抗內源性激素，與內源性激素受體結合，引發(fā)生物學反應干擾機體正常內分泌系統(tǒng)。
　　非受體介導作用是指西維因通過影響內分泌激素的合成、運輸、轉化和代謝等過

2、程干擾機體的內分泌系統(tǒng)。本試驗以雄性尼羅羅非魚為研究對象，探討不同濃度下西維因的暴露對羅非魚血清中內分泌相關激素水平、組織的DNA損傷以及內分泌激素合成途徑中相關基因表達水平的影響，為分析和評價西維因的內分泌干擾效應的非受體介導作用機制和遺傳毒性提供科學依據。
　　羅非魚暴露于不同劑量下的西維因(0.16mg/L、0.8mg/L、2mg/L)為期29天，酶聯免疫法測定血清中黃體生成素(LH)，卵泡刺激素(FSH)，三碘甲狀腺原氨酸

3、(T3)，甲狀腺素(T4)，雌二醇(E2)、睪酮(T)、卵黃蛋白原(VTG)、皮質醇(COR)水平，結果顯示:0.8mg/L劑量組各激素水平隨暴露時間的增加呈現先上升后下降再上升的變化趨勢，短期暴露第10天，0.8mg/L劑量組下的各激素水平明顯高于對照組及另外兩組，到暴露中期下降趨勢明顯，下降幅度最大，之后隨著暴露時間的增加而上升，體現了非單調劑量-效應關系;2mg/L劑量組隨著暴露時間的增加一直穩(wěn)步上升，并在暴露后期第29天達到最大

4、值，體現了時間-效應關系。西維因的暴露，促使了內分泌激素水平的波動性上升，干擾了下丘腦-腦垂體-性腺軸與下丘腦-腦垂體-甲狀腺軸的內分泌系統(tǒng)。
　　為研究西維因暴露對雄性羅非魚內分泌激素合成途徑中相關基因表達水平的影響，本實驗通過實時熒光定量PCR測定出精巢組織中部分基因3β-HSD1、11β-HSD2、CYP19a、CYP19b以及肝臟組織中3β-HSD1在整個暴露時期幾乎一直處于基因上調，驗證了西維因對雄性羅非魚具有雌激素效應

5、。CYP19a、CYP19b基因上調也促進了血清中雌二醇(E2)等性激素水平的升高。
　　西維因暴露第10天、19天、29天，采取羅非魚精巢組織，利用單細胞凝膠電泳技術立即測定西維因對精巢的DNA損傷。精巢DNA損傷程度隨著暴露時間的增加逐漸加劇，在暴露第29天，DNA損傷最為嚴重。10天的短期暴露和29天的長期暴露下，各劑量組的DNA損傷指標——尾部DNA量(TDNA％)、尾長(TL)、尾矩(TM)、Olive尾矩(OTM)。與

6、對照組相比差異顯著(P＜0.05)，西維因暴露10-19天，DNA損傷變化幅度較小。一定濃度范圍內的西維因對DNA損傷存在劑量-效應關系和時間-效應關系，0.16mg/L低劑量西維因對精巢DNA損傷程度與0.8mg/L和2mg/L劑量組相比差異顯著(P＜0.05)，中高劑量的西維因組差異不顯著。
　　研究表明西維因對雄性羅非魚內分泌干擾效應的非受體介導作用存在一定的影響，西維因暴露下的部分內分泌相關基因不同程度的表達，在一定范圍內