南荻3個抗逆相關NAC轉(zhuǎn)錄因子的功能研究.pdf

1、NAC轉(zhuǎn)錄因子在植物逆境脅迫響應中發(fā)揮著重要作用。南荻（Miscanthus lutarioriparius）為芒屬植物，原產(chǎn)于東亞地區(qū)，具有光合效率高、生物量大、水肥需求量低以及抗逆性強等特性，成為備受關注的纖維類生物能源作物，發(fā)展?jié)摿薮蟆Ｄ壳澳陷叮∕.lutarioriparius）中與逆境脅迫相關的NAC轉(zhuǎn)錄因子的報道較少。本文針對南荻3個抗逆相關 NAC轉(zhuǎn)錄因子（MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12）的功能進行了深入研究

2、，結果如下：
　?。?）通過序列分析和進化分析，MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12均屬于ATAF亞家族；
　　（2）分別構建了MlNAC蛋白融合YFP表達載體，通過農(nóng)桿菌介導在煙草葉片中瞬時表達，表明MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12蛋白均定位于細胞核，符合轉(zhuǎn)錄因子的特性；
　?。?）分別將基因的全長、N端和C端序列構建到酵母表達載體，進行轉(zhuǎn)錄激活試驗，結果表明：MlNAC4、MlNAC5和MlNAC1

3、2均為轉(zhuǎn)錄激活因子，其轉(zhuǎn)錄激活域均位于C端；
　?。?）通過hiTAIL-PCR技術克隆了MlNAC4、MlNAC5和MlNAC12的啟動子序列，長度分別為1296bp、726bp和1465bp，序列分析發(fā)現(xiàn)均包含多種脅迫響應相關的順式作用元件；
　?。?）構建了啟動子驅(qū)動GUS的表達載體并轉(zhuǎn)化擬南芥，GUS染色結果表明，pMlNAC5::GUS主要在下胚軸（5天幼苗）、蓮座葉主脈和莖與葉柄的交匯處、花藥、成熟果莢的離層區(qū)表

4、達；pMlNAC12::GUS的表達較為廣泛；
　?。?）構建了3個基因的過量表達載體（CaMV35S啟動子驅(qū)動）并轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，在正常生長條件下，MlNAC5和MlNAC12過表達擬南芥植株均表現(xiàn)出生長抑制的表型，如植株矮化、開花延遲、雄蕊短小、結實率降低等；
　?。?）MlNAC5和MLNAC12過表達植株表現(xiàn)出對ABA超敏感，在ABA處理條件下，與野生型相比，過表達植株種子發(fā)芽率降低更為顯著，主根伸長也受到更為顯著