Mn-SOD在乳酸乳球菌中的表達及雙歧桿菌染色體整合質粒載體的構建.pdf

1、目的： 構建含錳超氧化物歧化酶基因的原核高效表達質粒pBV220-sod并在乳酸乳球菌(MGl363)中表達，同時構建雙歧桿菌整合質粒載體，為下一步SOD發(fā)酵奶的研制奠定基礎。 方法： 1)根據GenBank中報道的大腸桿菌MGl655全基因組DNA序列中SOD的編碼基因序列設計引物，PCR擴增大腸桿菌錳超氧化物歧化酶基因，并將其克隆入原核高效表達質粒載體pBV220中構建重組質粒pBV220-sod。

2、 2)優(yōu)化乳酸乳球菌MGl363的電轉化條件，并在此條件下將重組質粒pBV220-sod電轉入MGl363中。用黃嘌呤氧化酶法對SOD的表達活性進行測定，同時用SDS-PAGE觀察SOD的表達量。 3)以雙歧桿菌基因組DNA為模板，根據16SrRNA序列設計引物進行PCR擴增，并將其克隆入質粒pBV220-sod中構建出整合質粒載體pBV220-sod-bif。 結果： 1．成功地構建了重組質粒pBV

3、220-sod，經酶切和PCR鑒定后與預期結果吻合。核酸序列測定顯示插入的soda基因與GenBank報道的序列完全一致。 2．優(yōu)化了乳酸乳球菌MGl363的電轉化條件，確定了最佳參數(shù)：電壓10kV／cm，電阻20012，電容25gF，時間4．5～5．Oms，利用電轉化成功地將重組質粒pBV220-sod導入MGl363中。用黃嘌呤氧化酶法測得SOD的表達活性約683．7NU／mgprot。SDS-PAGE顯示SOD的表達量有